[發明專利]一種高得率酶法輔助提取二苯乙烯苷的制備方法

在審

• 申請號: 201610144375.4
• 申請日: 2016-03-15
• 公開（公告）號: CN105586378A
• 公開（公告）日: 2016-05-18
• 發明（設計）人: 汪巍;張帆;林大偉
• 申請（專利權）人: 常州市藍勖化工有限公司
• 主分類號: C12P19/44
• 分類號: C12P19/44
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明公開了一種高得率酶法輔助提取二苯乙烯苷的制備方法，屬于二苯乙烯苷制備技術領域。

背景技術

二苯乙烯苷又稱芪多酚，屬于多羥基芪類化合物，二苯乙烯苷是何首烏藥材中特有的生物活性成分，是何首烏藥材的專屬性指標組分，易溶于水、甲醇、乙醇。藥理研究表明，二苯乙烯苷具有抗氧化清除自由基、抗衰老、降低膽固醇、保肝及神經保護作用，可開發研制治療老年性癡呆、降血脂和抗動脈粥樣硬化的新藥物。

現有從何首烏中分離制備二苯乙烯苷的方法:首先采用稀乙醇為提取溶劑對何首烏藥材進行回流提取，然后使用乙酸乙酯對提取液進行萃取，再對乙酸乙酯萃取層依次進行硅膠柱層析和SephadexLH-20柱層析分離，最后制備得到含量為85％的二苯乙烯苷。該方法的主要缺點在于：①采用高溫回流提取二苯乙烯苷，在高溫條件下二苯乙烯苷易被氧化和糖苷鍵斷裂，該提取方法對二苯乙烯苷造成破壞；②采用常壓柱色譜多次分離，過程繁瑣、耗時長，溶劑耗量大，提高了制備成本；③組分在常壓柱子中停留時間過長而產生死吸附，樣本損失大，回收率較低。

除此以外，目前人工合成的二苯乙烯苷極具困難，且成本昂貴，合成出的二苯乙烯苷性能不夠穩定，且純度不高，目前從植物中提取二苯乙烯苷是一種常見的方法，但是大部分從植物中提取還都采用了大量的有機溶劑進行提取，不僅操作繁瑣，價格昂貴，且制得的二苯乙烯苷的純度依舊不高，且存在有機物殘留的問題。

因此，制得一種高純度，無有機溶劑的二苯乙烯苷是很有必要的事情。

發明內容

本發明主要解決的技術問題：針對目前傳統方法在從植物中提取二苯乙烯苷的過程中，往往都是在高溫下進行，使得二苯乙烯苷易被氧化并造成糖苷鏈斷裂，另外在提取時，還采用大量的有機溶劑，不僅操作繁瑣，價格昂貴，殘留的有機溶劑還會污染環境，使制得的二苯乙烯苷純度較低的現狀，提供了一種以何首烏為原料，先經高壓均質再利用復合酶劑酶解以提高提取率，再通過微波醇提后，旋蒸濃縮，最后干燥研磨，從而得到高得率酶法輔助提取二苯乙烯苷。該方法操作簡便，在提取的過程中無需添加大量有機溶液，避免了有機物殘留，而且操作環境溫和，避免了高溫導致二苯乙烯苷氧化和糖苷鏈斷裂的問題，最終使得二苯乙烯苷提取率達95％以上，純度高達99％以上，適合大規模生產應用。

為了解決上述技術問題，本發明所采用的技術方案是：

（1）稱取1～2kg何首烏洗凈后晾干放入氣流粉碎機中，以3m³/min空氣耗量和0.70～0.80MPa空氣壓力進行粉碎，將得到何首烏粉末按固液比為1:2倒入蒸餾水中，放置在磁力攪拌機上，以200～300r/min轉速攪拌混合10～20min，得到何首烏粉末懸濁液；

（2）將上述得到的何首烏粉末懸濁液移入高壓均質機，以2.0～3.0L/h流速和100～110MPa壓力進行高壓均質處理5～8min，量取1.0～1.2L均質后的何首烏混合液裝入體積為2L的陶瓷酶解罐中，加入酶解底物總質量0.2～0.5%復合酶劑，用濃度為0.5mol/L醋酸溶液調節pH至4.0～5.0，放置在恒溫箱中于35～45℃下密封酶解60～80min；

（3）酶解完成后過濾分離去除濾渣，得到酶解液，將酶解液裝入管式超濾裝置中，利用10萬分子量的醋酸纖維素膜作為超濾膜，并在0.1～0.2MPa的驅動壓力和20～30℃的條件下進行超濾，收集濾液；

（4）將上述超濾后的濾液和無水乙醇按體積比為1:1進行混合，放入微波提取儀中，以200～250W功率加熱至40～50℃，保溫微波醇提1～2h，醇提完成后將混合液放入旋轉蒸發器，加熱升溫至45～55℃，旋蒸回收無水乙醇并濃縮處理直至混合液體積變為原體積的1/8～1/6，得到濃縮液；

（5）將上述得到的濃縮液放入真空凍干機，以1℃/min速率進行降溫直至冷阱溫度達到-40～-30℃，冷凍干燥30～40min，干燥后再放入瑪瑙研缽中研磨成粉并過200目標準篩，包裝，即得二苯乙烯苷。

步驟（2）中所述的復合酶劑是由纖維素酶和中性蛋白酶按質量比為2:1復配制得。

本發明的應用方法是：將本發明制得的二苯乙烯苷粉末制成二苯乙烯苷膠囊，其中每個膠囊中裝有1～3g二苯乙烯苷粉末，食用時，配以250～350mL溫開水送服，每日三餐后服用一次，每次服用1～3粒，長期使用10～15天，測得人體膽固醇降低，抵抗力得到了提高，且抗衰老的效果顯著。