[發明專利]具有細胞示蹤功能的液體熒光微球的制備及應用方法有效
| 申請號： | 201610144288.9 | 申請日： | 2016-03-14 |
| 公開（公告）號： | CN105778916B | 公開（公告）日： | 2019-02-26 |
| 發明（設計）人： | 楊軍;王巖;劉永軍;李寒陽 | 申請（專利權）人： | 哈爾濱工程大學 |
| 主分類號： | A61K49/00 | 分類號： | A61K49/00 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 150001 黑龍江省哈爾濱市南崗區*** | 國省代碼： | 黑龍江;23 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 具有 細胞 功能 液體 熒光 制備 應用 方法 | ||
1.一種具有細胞示蹤功能的液體熒光微球的制備方法，其特征是：
(1)將納米晶體NaYF4:Yb3+,Er3+與環己烷混合，超聲處理一小時得到混合溶液，納米晶體NaYF4:Yb3+,Er3+與環己烷的混合比例為1μg納米晶體NaYF4:Yb3+,Er3+加入到1mL環己烷中；
(2)向所述混合溶液中加入二辛脂，超聲處理一小時，得到納米晶體均勻分散的二辛脂溶液，加入二辛脂的體積與環己烷的體積相等；
(3)用毛細注射管抽取所述納米晶體均勻分散的二辛脂溶液，注入體外培養的細胞中，在細胞內液中形成具有細胞示蹤功能的液體熒光微球，
所述毛細注射管是使用拉錐機將外徑為125μm、內徑為100μm的毛細石英管拉成內徑為10μm的錐形微針；
所述體外培養的細胞的培養方法為：
(1)將1mL細胞凍存管從液氮中取出，立即投入37℃水浴鍋中，2分鐘后，待全部融化形成細胞懸液取出凍存管，移至超凈工作臺；
(2)將細胞懸液吸到裝10mL含重量比10％的胎牛血清培養液的離心管中，1000轉/分離心5分鐘；
(3)去掉上清液，加1mL培養液把細胞懸浮起來，吸到裝有10mL培養液的10cm培養皿中前后左右輕輕搖動，使培養皿中的細胞均勻分布。
2.一種生物細胞示蹤微球用于細胞示蹤的方法，其特征是：
(1)將納米晶體NaYF4:Yb3+,Er3+與環己烷混合，超聲處理一小時得到混合溶液，納米晶體NaYF4:Yb3+,Er3+與環己烷的混合比例為1μg納米晶體NaYF4:Yb3+,Er3+加入到1mL環己烷中；
(2)向所述混合溶液中加入二辛脂，超聲處理一小時，得到納米晶體均勻分散的二辛脂溶液，加入二辛脂的體積與環己烷的體積相等；
(3)用毛細注射管抽取所述納米晶體均勻分散的二辛脂溶液，注入體外培養的細胞中，在細胞內液中形成具有細胞示蹤功能的液體熒光微球；
(4)使用細胞注射器將含有具有細胞示蹤功能的液體熒光微球的細胞注入生物體內；
(5)半導體激光器發射980nm激光照射生物體表，位于細胞內液的含有具有細胞示蹤功能的液體熒光微球在980nm激光激發下發出綠色熒光；
所述毛細注射管是使用拉錐機將外徑為125μm、內徑為100μm的毛細石英管拉成內徑為10μm的錐形微針；
所述體外培養的細胞的培養方法為：
(1)將1mL細胞凍存管從液氮中取出，立即投入37℃水浴鍋中，2分鐘后，待全部融化形成細胞懸液取出凍存管，移至超凈工作臺；
(2)將細胞懸液吸到裝10mL含重量比10％的胎牛血清培養液的離心管中，1000轉/分離心5分鐘；
(3)去掉上清液，加1mL培養液把細胞懸浮起來，吸到裝有10mL培養液的10cm培養皿中前后左右輕輕搖動，使培養皿中的細胞均勻分布。
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