[發(fā)明專利]一種牡丹組織培養(yǎng)再生的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610143917.6
• 申請日: 2016-03-14
• 公開（公告）號: CN105766636B
• 公開（公告）日: 2018-08-17
• 發(fā)明（設計）人: 姚陸銘;朱木蘭;王彪;盧欣欣;武天龍
• 申請（專利權）人: 上海交通大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00;A01C1/00;A01C1/08
• 代理公司: 上海旭誠知識產(chǎn)權代理有限公司 31220
• 代理人: 鄭立

1.一種牡丹組織培養(yǎng)再生的方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)將牡丹種子用濃硫酸浸泡處理、沖洗并消毒；

2)培養(yǎng)所述牡丹種子產(chǎn)生胚根，然后誘導愈傷組織及體細胞胚；

3)所述體細胞胚再生形成次生體細胞胚團；

4)將所述次生體細胞胚團分化形成子葉胚；

5)所述子葉胚進一步分化形成不定根；

6)將分化形成不定根的外植體煉苗并形成完整植株；

誘導愈傷組織使用的誘導培養(yǎng)基組分為：蔗糖30g/L，MSB 4.44g/L，2,4-D 40mg/L，凝膠2g/L，pH值7.0；

所述體細胞胚再生形成次生體細胞胚團使用的繼代培養(yǎng)基組分為：蔗糖30g/L或60g/L，MSB 4.44g/L,凝膠2g/L，2,4-D 20mg/L，pH值7.0；

所述次生體細胞胚團分化形成子葉胚使用的分化培養(yǎng)基組分為：MSB 4.44g/L,麥芽糖60g/L，活性炭5g/L，2g/L凝膠，pH值5.7；

所述子葉胚進一步分化形成不定根使用的生根培養(yǎng)基組分為：MSB 4.44g/L,蔗糖30g/L，2g/L凝膠，pH值5.7。

2.如權利要求1所述的牡丹組織培養(yǎng)再生的方法，其特征在于，步驟1)具體為：選用橢圓形或卵狀球形牡丹種子，3-5℃低溫處理80-100天后，于20-28℃條件下用濃硫酸浸泡2-3分鐘，用流水沖洗3-4遍后用次氯酸鈉溶液消毒15-25分鐘，之后在無菌條件下用無菌水清洗3-4遍，用無菌濾紙吸干水分。

3.如權利要求1所述的牡丹組織培養(yǎng)再生的方法，其特征在于，步驟4)具體為：選擇生長良好、表面光滑、黃綠色的、直徑為2.5-3.5mm的所述次生體細胞胚團轉入分化培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)，直到可觀察到帶有兩片子葉的子葉胚。

4.如權利要求3所述的牡丹組織培養(yǎng)再生的方法，其特征在于，所述次生體細胞胚團在所述分化培養(yǎng)基中培養(yǎng)的時間為2周。

5.如權利要求1所述的牡丹組織培養(yǎng)再生的方法，其特征在于，步驟6)具體為：當分化生根外植體長到高度5-7cm的植物體時，將幼苗暴露于空氣中煉苗5-7天，然后轉入濕潤的蛭石中，一周后，將植株移入溫室大田中培養(yǎng)。

6.如權利要求5所述的牡丹組織培養(yǎng)再生的方法，其特征在于，在所述溫室大田中培養(yǎng)的條件為：溫度20-25℃，空氣濕度85％，每隔7天噴灑一次廣譜殺菌劑。

7.如權利要求1所述的牡丹組織培養(yǎng)再生的方法，其特征在于，步驟2)中，所述牡丹種子在MSB培養(yǎng)基中培養(yǎng)13-15天，培養(yǎng)溫度20-25℃，光照強度20000lux，每天光照15-17小時，誘導胚根生長；切取胚根置于誘導培養(yǎng)基中培養(yǎng)28-32天，誘導愈傷組織及體細胞胚生長。

8.如權利要求1所述的牡丹組織培養(yǎng)再生的方法，其特征在于，步驟3)中，將步驟2)中獲得的表面光滑、顏色黃綠的體細胞胚從愈傷組織團上取下，并置于繼代培養(yǎng)基中增殖培養(yǎng)19-21天，形成所述次生體細胞胚團。

9.如權利要求1所述的牡丹組織培養(yǎng)再生的方法，其特征在于，步驟5)具體為：將所述子葉胚放在表面鋪有濾紙的分化培養(yǎng)基平皿中，黑暗培養(yǎng)3-7天后將干燥的所述子葉胚移入生根培養(yǎng)基中進行分化形成不定根。