[發(fā)明專利]與豬繁殖性狀相關(guān)的分子標(biāo)記及其檢測方法和應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610143591.7
• 申請日: 2016-03-14
• 公開（公告）號: CN105671172A
• 公開（公告）日: 2016-06-15
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 吳井生;陳永霞;郭蘋;陳超
• 申請（專利權(quán)）人: 江蘇農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 南京蘇高專利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙) 32204
• 代理人: 許丹丹

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及動物分子育種領(lǐng)域，尤其涉及一種基于KISS-1基因的與豬繁殖 性狀相關(guān)的分子標(biāo)記及其檢測方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

分子標(biāo)記輔助選擇是基因工程在現(xiàn)代家畜育種中的一項(xiàng)重要應(yīng)用，利用與育 種性狀相關(guān)的各種標(biāo)記代替以表型為基礎(chǔ)的選擇，從分子水平上分析個體的遺傳 組成，從而實(shí)現(xiàn)對基因型的直接選擇，可克服直接選擇的弊端，提高選擇的準(zhǔn)確 性和縮短世代間隔。

總產(chǎn)仔數(shù)、產(chǎn)活仔數(shù)等豬的繁殖性狀是重要的經(jīng)濟(jì)性狀，直接關(guān)系到養(yǎng)豬業(yè) 的經(jīng)濟(jì)效益。

KISS-1基因是LeeJH等于1996年利用消減雜交的方法研究人黑瘤素細(xì)胞 不同轉(zhuǎn)移能力時發(fā)現(xiàn)并命名，具有抑制腫瘤轉(zhuǎn)移作用。人KISS-1基因被定位于 1q32-41，包含4個外顯子和3個內(nèi)含子，前2個外顯子不翻譯。KISS-1基因的 編碼產(chǎn)物為kisspeptin，是G蛋白偶聯(lián)受體54(Gprotein-coupledreceptor54, GPR54)的配體，并組成KISS-1/GPR54系統(tǒng)。越來越多的研究表明，KISS-1/GPR54 系統(tǒng)在哺乳動物初情期的啟動中起關(guān)鍵作用，kisspeptin對下丘腦-垂體-性腺軸具 有重要調(diào)控作用。目前，尚未見KISS-1基因與豬繁殖性能關(guān)聯(lián)分析的報道。

發(fā)明內(nèi)容

發(fā)明目的：針對現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題，本發(fā)明提供了一種與豬繁殖性狀相 關(guān)的分子標(biāo)記，為豬的分子育種提供新的思路，本發(fā)明的另一個目的是提供所述 分子標(biāo)記的檢測方法和應(yīng)用。

技術(shù)方案：本發(fā)明所述的與豬繁殖性狀相關(guān)的分子標(biāo)記，它為豬KISS-1基 因片段，所述的豬KISS-1基因片段含有多態(tài)性位點(diǎn)，所述的多態(tài)性位點(diǎn)位于豬 KISS-1基因核苷酸序列中的第2343位，所述的多態(tài)性位點(diǎn)具有G/C堿基的變異。

豬KISS-1基因序列的核苷酸序列如SEQIDNO.4所示，所述的多態(tài)性位點(diǎn)， 與豬總產(chǎn)仔數(shù)、產(chǎn)活仔數(shù)緊密相關(guān)，可利用該位點(diǎn)開發(fā)與豬繁殖性狀相關(guān)的分子 標(biāo)記。本發(fā)明中，描述多態(tài)性位點(diǎn)的位置時，以基因的轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)核苷酸位置為 1bp，上游為負(fù)，下游為正，順次記數(shù)，第2343bp位是指KISS-1基因的轉(zhuǎn)錄起 始點(diǎn)開始的第2343bp位，該位點(diǎn)處于SEQIDNO.4所示序列的第2643bp位。

本發(fā)明所述的豬KISS-1基因片段如SEQIDNO.1所示。當(dāng)然，本發(fā)明所述 的豬KISS-1基因片段也可以為包含如SEQIDNO.1所示的核苷酸序列的DNA 片段。根據(jù)檢測方法，可以選擇合適長度的能夠包含多態(tài)性位點(diǎn)的DNA片段。

本發(fā)明還提供了所述分子標(biāo)記的檢測方法，包括：

(1)根據(jù)所述的分子標(biāo)記的核苷酸序列設(shè)計引物；

(2)以待檢測豬的基因組DNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增；

(3)判斷PCR擴(kuò)增產(chǎn)物中多態(tài)性位點(diǎn)的類型。

步驟(3)中，可對PCR產(chǎn)物進(jìn)行測序或電泳分析，判斷多態(tài)性位點(diǎn)的堿基 類型。

優(yōu)選的，步驟(1)中，上游引物的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示，下游 引物的核苷酸序列如SEQIDNO.3所示。利用該引物，可采用PCR-RFLP的方 法準(zhǔn)確方便的檢測多態(tài)性位點(diǎn)的類型。

本發(fā)明還提供了所述的分子標(biāo)記在豬繁殖性狀選擇中的應(yīng)用。

具體的，豬可以為小梅山豬、楓涇豬或大白豬。繁殖性狀為總產(chǎn)仔數(shù)或產(chǎn)活 仔數(shù)。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果為：

本發(fā)明研究發(fā)現(xiàn)，豬KISS-1基因第2外顯子存在一個突變位點(diǎn)(即多態(tài)性 位點(diǎn))，該位點(diǎn)位于豬KISS-1基因核苷酸序列中的第2343位，該突變位點(diǎn)與豬 的繁殖性狀尤其是總產(chǎn)仔數(shù)或產(chǎn)活仔數(shù)相關(guān)，且容易檢測，從而本發(fā)明根據(jù)該突 變位點(diǎn)提供了一種與豬繁殖性狀相關(guān)的分子標(biāo)記，并提供了該分子標(biāo)記的檢測方 法及在豬繁殖性狀選擇中的應(yīng)用，為豬分子育種、研究豬繁殖生理機(jī)制提供基礎(chǔ)。

附圖說明

圖1為實(shí)施例1中PCR-RFLP檢測結(jié)果；

圖2為實(shí)施例1中PP和QQ基因型個體PCR產(chǎn)物測序結(jié)果；

圖3為實(shí)施例1中PP和QQ基因型個體的氨基酸比對結(jié)果；

圖4為實(shí)施例1豬KISS-1基因G2343C酶切位點(diǎn)分析結(jié)果。

具體實(shí)施方式