[發明專利]桿菌肽鍵合型色譜填料的制備方法及其應用

有效

• 申請號: 201610143020.3
• 申請日: 2016-03-10
• 公開（公告）號: CN105771943B
• 公開（公告）日: 2018-12-21
• 發明（設計）人: 蘇夢翔;夏敏;狄斌
• 申請（專利權）人: 中國藥科大學
• 主分類號: B01J20/286
• 分類號: B01J20/286;B01J20/30
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明提供一種環肽(桿菌肽)鍵合型色譜填料，其含有大量酰胺鍵。具體而言，本發明提供的固定相填料具有親水性質，其制備方法是通過有機交聯劑將環狀多肽(桿菌肽)鍵合到硅烷化硅膠載體上。該方法操作簡便，合成周期短，鍵合效率高，成本低廉，具有更優良的穩定性和重現性。本發明特點是含有酰胺、氨基和羧基等多種官能團，具有很強的極性和形成氫鍵的能力。本發明能應用于親水色譜條件下，對絕大部分極性化合物都具有很好的分離選擇性，具有色譜柱穩定性好的優點。

技術領域

本發明涉及一種環肽鍵合型色譜填料及其制備方法，具體涉及到通過有機交聯劑將天然環狀桿菌肽鍵合硅烷化硅膠載體上獲得的色譜填料，可應用于各種藥物色譜分析和分離，屬于色譜分離技術領域。

背景技術

高效液相色譜法(HPLC)被廣泛應用于涉及醫藥、環保、生命科學等幾乎所有基礎和應用研究領域，現已發展為必不可少的分析工具。高效液相色譜的發展以色譜填料的發展為基礎，新型液相色譜填料的開發具有十分重要的科研意義和應用價值。反相液相色譜(RPLC)是目前應用最為廣泛的色譜分離技術，適合分離分析大部分弱極性和中等極性的化合物，但是，強極性和離子型化合物在RPLC上往往無保留或保留很弱。為解決這個問題，一般在流動相中加入離子對試劑(如各種烷基磺酸鹽或者季銨鹽)以實現強極性或離子型化合物的分離，但離子對試劑屬于非揮發性鹽，不能與高靈敏度高專屬性的液質聯用技術(LC-MS)匹配。雖然流動相為非極性溶劑的正相色譜(NPLC)也能夠分析強極性化合物，但NPLC與LC-MS也不兼容，這是由于NPLC的非極性流動相在LC-MS的接口處無法使被測物離子化；此外，NPLC還會存在某些被分析物在非極性流動相中溶解性較差等其他問題。所以，實現對強極性化合物的LC-MS分析一直是色譜工作者想要解決的科學問題。

親水作用色譜技術(HILIC)的出現為解決上述問題提供了可能性。HILIC技術采用由高比例的有機相(主要為乙腈，含量通常大于60％)及少量的水相組成的二元洗脫機作為流動相，該流動相可以較好的在LC-MS接口處蒸發并使被分析物離子化，為強極性藥物、核酸和多肽等物質的研究提供了一個較優的色譜條件選擇。目前商品化和研究報道的親水色譜填料種類包括純硅膠、極性基團(如氨基、酰胺、氰基、二醇、聚琥珀酰亞胺、環糊精、兩性離子)鍵合硅膠固定相、有機聚合物基質的HILIC固定相、整體HILIC固定相[Ray S，etal.Analyst，2012，137，4907-4909]。如楊鐸等人利用巰基.烯烴“點擊化學”制備了聚丙烯酰胺型色譜填料，核苷、堿基和寡糖可以在這種親水作用固定相上更好地分離[楊鐸，等.分析化學，2015，43(10)：1439-1444.]。通過離子相互作用將纖維素涂覆在磺化的硅膠材料上，涂覆過程環保安全，在糖生物學和糖蛋白組學都有廣泛的應用[Sheng Q，etal.J.Chromatogr.A，2013，1291：56-63.]。Yuan等人通過熱聚合技術原位制備的親水性有機聚合物整體柱在低乙腈濃度下(5％，v/v)親水性相互作用依然存在，親水相互作用區間大[Yuan G，et al.J.Chromatogr.A，2013，1301：88-97.]。盡管這些親水色譜填料對分離極性化合物展示出良好的選擇性與極佳的重現性，但是也存在著一些不足：某些溶劑能溶解或溶脹涂覆型色譜柱上涂覆的多糖衍生物，因此流動相的選擇受限。雖然現有的鍵合型能克服這些弱點，但是鍵合型親水色譜填料通常存在反應步驟多、鍵合效率低等缺點。整體柱易于改性、柱效高、反壓低、傳質速度快，但孔徑的重復性難以保證，因此其色譜性能批間差異較大。除此之外，機械穩定性通常較差、有機聚合物整體柱溶劑作用下柱體膨脹等缺點也限制了整體柱的進一步廣泛使用。盡管近幾年HILIC技術發展十分迅速，但親水色譜填料的種類依然十分有限，值得進一步研究拓展。