[發明專利]通過轉基因嚙齒類動物制備人源化駝類單域抗體的方法

在審

• 申請號: 201610139563.8
• 申請日: 2016-03-12
• 公開（公告）號: CN105777894A
• 公開（公告）日: 2016-07-20
• 發明（設計）人: 宋海鵬;李敏;王慶東
• 申請（專利權）人: 長春力太生物技術有限公司
• 主分類號: C07K16/00
• 分類號: C07K16/00;C12N15/89
• 代理公司: 北京市眾天律師事務所 11478
• 代理人: 李新軍

1.一種通過轉基因嚙齒類動物制備人源化IgG單域抗體的方法，所 述方法包括以下步驟：

(1)構建含有人源化IgG抗體VHH區編碼序列串聯結構的細菌人工 染色體DNA；

(2)將步驟(1)獲得的細菌人工染色體DNA轉導入嚙齒類動物受 精卵雄性原核內；

(3)將步驟(2)獲得的受精卵移入假孕雌性嚙齒類動物身體兩側的 輸卵管內，使胚胎在代孕母體內發育，經一個完整的發育周期產下子代；

(4)鑒定出含有人源化單域抗體基因座的轉基因嚙齒類動物；

(5)將鑒定出的轉基因嚙齒類動物與采用同源重組方法敲除內源性 抗體重鏈IgH、輕鏈IgKappa和IgLamda的嚙齒類動物雜交，最終獲得含 有人源化單域抗體基因座，同時內源性抗體重鏈IgH、輕鏈IgKappa和 IgLamda基因被敲除的人源化單域抗體轉基因嚙齒類動物；

(6)從步驟(5)獲得的人源化單域抗體轉基因嚙齒類動物中獲得單 克隆單域納米抗體。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述嚙齒類動物為小 鼠。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，步驟(1)所述VHH 區編碼序列串聯結構由下列序列中一個或多個序列串聯而成：SEQID NO:1-13。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，步驟(2)所述的導入 為顯微注射。

5.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，步驟(2)所述的細菌 人工染色體DNA先被克隆入載體后傳代和保存，之后再被切割釋放和轉 導。

6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，所述載體為pBACe3.6。

7.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，步驟(4)所述的鑒定 為PCR鑒定。

8.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，在步驟(3)中按照 20個受精卵/側的數量將受精卵移入假孕母鼠身體兩側內。

9.一種人源化的駝類單域抗體，其特征在于，所述抗體的可變區序 列選自SEQIDNO：14、16、18、20、22中的任一個。

10.根據權利要求9所述的抗體，其特征在于，所述抗體還含有恒定 區，所述恒定區的序列如SEQIDNO：24所示。