[發明專利]一種啟動子文庫的構建方法及其應用

在審

• 申請號: 201610138940.6
• 申請日: 2016-03-11
• 公開（公告）號: CN105603537A
• 公開（公告）日: 2016-05-25
• 發明（設計）人: 姜岷;朱興貴;馬江鋒;吳明科;高有軍
• 申請（專利權）人: 南京工業大學
• 主分類號: C40B50/06
• 分類號: C40B50/06;C40B40/06;G01N21/31;G01N21/64
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 王月霞

1.一種啟動子文庫的構建方法，其特征在于，包括如下步驟：

1）、根據原核生物啟動子的保守區、半保守區、隨機序列和轉錄起始位點，設計出具有 啟動子特征的寡核苷酸序列；

2）、將步驟1）設計得到的寡核苷酸序列經退火、延伸形成雙鏈，再連接到帶有報告基因 的載體上，得到啟動子的突變庫；

3）、將步驟2）得到的啟動子的突變庫轉入到宿主細胞中，涂布到相應抗性的平板中，得 到啟動子文庫。

2.根據權利要求1所述的啟動子文庫的構建方法，其特征在于，步驟1）中所述具有啟動 子特征的寡核苷酸序列為：CGGAATTCWTWNWN₄AWWWNNTTCTTGACAN₁₇TATAATDN4RTWWCCATGGGG GGCGGTCTAGAGC。

3.根據權利要求1所述的啟動子文庫的構建方法，其特征在于，步驟2）中所述報告基因 為綠色熒光蛋白gfp基因或者半乳糖苷酶基因lacZ。

4.根據權利要求1所述的啟動子文庫的構建方法，其特征在于，步驟2）中所述載體的報 告基因前加入有一段RBS核糖體結合位點。

5.一種啟動子強度的篩選方法，其特征在于，將含有突變庫的菌株，分別涂布到相應抗 性的平板中，挑選單菌落，培養，檢測其OD₆₀₀和相對熒光強度RFU，利用RFU/OD₆₀₀作為衡量啟 動子強弱的標準，其值越大，啟動子強度越強，反之。

6.一種啟動子文庫，其特征在于，所述的啟動子文庫包括SEQIDNO:1、SEQIDNO: 2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO: 8、SEQIDNO:9或SEQIDNO:10所示核苷酸序列的啟動子。

7.根據權利要求6所述的啟動子文庫，其特征在于，所述的SEQIDNO:1、SEQIDNO: 2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO: 8、SEQIDNO:9或SEQIDNO:10所示核苷酸序列的啟動子強度呈遞增關系。

8.權利要求6所述的啟動子文庫在調節目的基因的表達中的應用。