[發明專利]一種烏桕不定根離體再生的方法

有效

• 申請號: 201610137402.5
• 申請日: 2016-03-10
• 公開（公告）號: CN105766634B
• 公開（公告）日: 2018-04-20
• 發明（設計）人: 侯金艷;吳麗芳;趙華;毛穎基;陳雪
• 申請（專利權）人: 中國科學院合肥物質科學研究院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 合肥市浩智運專利代理事務所(普通合伙)34124
• 代理人: 丁瑞瑞

技術領域

本發明屬于植物生物技術領域，具體涉及一種烏桕不定根離體再生的方法。

背景技術

烏桕(SapiumsebiferumRoxb.)與油桐、油茶、核桃并列為我國四大木本油料植物。為大戟科(Euphorbiaceae)烏桕屬(Sapium)落葉喬木，為我國原生油料樹種，在中國已有1400年的栽培史。此外，烏桕樹姿優美，葉形秀麗，入秋后葉色呈現紅、橙、黃、紫等顏色，集觀果、觀葉、觀型與一身，廣泛分布于中國、日本、印度等熱帶、亞熱帶地區。烏桕種子既含油又含脂。榨出的油分為桕脂和梓油。桕脂是我國傳統出口物質和重要的工業原料，是肥皂、膠片、塑料薄膜、蠟紙、護膚脂、防銹涂劑、固體酒精和高級香料等的主要原料；桕脂中富含POP，也是生產類可可脂的理想原料。梓油是理想的生物柴油原料油。因此，利用烏桕作為我國生物質能源開發和景觀應用的候選種質資源，不僅有利于緩解我國的能源問題，也是我國經濟發展和環境優化的需要。

由于采用傳統種苗繁育技術，很難滿足烏桕規模化種植和遺傳改良的需要。隨著生物技術的發展，植物組織培養技術因其繁育周期短，繁殖系數大，在林木優良基因型快速繁殖、遺傳改良、品種保存等方面呈現出巨大的應用潛力。目前，有關利用組織培養技術對烏桕進行種苗繁育的研究主要集中在以種子實生苗、幼胚或以優良株系的莖段、無菌苗葉片和葉柄為外植體。而關于利用優良株系無菌苗的不定根為外植體進行烏桕植株再生的研究尚未有報道。

本發明公開的一種以烏桕單株快繁獲得的無菌苗的不定根為外植體，通過直接誘導叢生芽或間接誘導愈傷組織，獲得烏桕再生植株的方法，為烏桕優良株系的快繁和誘變育種提供了新的技術路徑，同時為后期烏桕的品種改良和再生機理研究奠定基礎。

發明內容

本發明的目的在于運用植物組織培養技術，提供一種烏桕不定根離體再生的方法。該方法利用烏桕無菌苗的不定根為外植體，通過直接誘導叢生芽和間接誘導愈傷組織建立烏桕高效再生體系。

為了實現上述目的，本發明采用如下技術方案：一種烏桕不定根離體再生的方法，包括如下幾個步驟：

(1)取烏桕株系離體快繁所獲得的無菌苗的不定根為外植體材料，切段；

(2)將多個不定根切段接種于誘導培養基中進行叢生芽或愈傷組織的誘導，形成叢生芽或愈傷組織；

(3)將步驟(2)中產生的叢生芽或愈傷組織的不定根外植體轉接于增殖培養中進行叢生芽或愈傷組織的增殖；

(4)將步驟(3)中增殖后的愈傷組織切塊，轉接于分化培養基上進行愈傷組織的分化；

(5)將步驟(3)中的增殖后的叢生芽轉接于叢生芽伸長培養基中，進行叢生芽的伸長；

(6)待叢生芽伸長后將其轉到生根培養基中生根，無菌苗誘導出的不定根后，進行馴化、移栽，獲得完整的烏桕再生植株。

優選地：所述的不定根為烏桕株系經過莖段快繁后，所獲得的無菌苗的不定根，接種前將不定根切成0.3～0.6cm的切段備用。

優選地：所述的不定根誘導叢生芽的培養基為:MS+0.1～8.0mg/L6-BA+0.01～3.0mg/L NAA+0.01～1.0mg/LIBA+30g/L蔗糖+7.5g/L瓊脂，pH＝5.8。

優選地：所述的不定根誘導愈傷組織的培養基為：MS+0.1～4.0mg/L 6-BA+0.1～4.0mg/L NAA+30g/L蔗糖+7.5g/L瓊脂，pH＝5.8。

優選地：所述的不定根叢生芽增殖培養基為MS+0.1～3.0mg/L 6-BA+0.01～1.0mg/L IBA+30g/L蔗糖+7.5g/L瓊脂，pH＝5.8；所述的不定根愈傷組織的增殖培養基為MS+0.1～3.0mg/L6-BA+0.1～4.0mg/LNAA+30g/L蔗糖+7.5g/L瓊脂，pH＝5.8。

優選地：所述的增殖后的愈傷組織切塊是指將增殖后的愈傷組織切成(0.2～0.4cm)²大小的切塊；所述的愈傷組織分化培養基為MS+0.3～3.0mg/L 6-BA+30g/L蔗糖+7.5g/L瓊脂，pH＝5.8。

優選地：所述的烏桕不定根愈傷組織分化的叢生芽和不定根直接誘導的叢生芽的伸長培養基為1/2MS+0.2～2.0mg/L6-BA+30g/L蔗糖+7.5g/L瓊脂，pH＝5.8。

優選地：所述的不定根再生整個過程的培養條件均為培養溫度為24±2℃，光照強度2000～3000lx，光照周期為14/10(光照/黑暗)。