[發(fā)明專利]一種牡丹籽降血糖肽及其純化方法和應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610134873.0
• 申請日: 2016-03-09
• 公開（公告）號: CN105624251B
• 公開（公告）日: 2018-11-16
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 顏輝;蔡豪;賈俊強;吳瓊英;熊孟;江明珠
• 申請（專利權(quán)）人: 江蘇科技大學(xué)
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/20;C07K1/18;C07K1/16;A61K38/16;A61P3/10;A23L33/18;A23L33/185
• 代理公司: 南京蘇高專利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙) 32204
• 代理人: 黃天天

本發(fā)明公開了一種牡丹籽降血糖肽，其制備方法如下：(1)牡丹籽脫脂粉與水混合均勻，超聲攪拌提取蛋白，離心，所得沉淀重復(fù)提取兩次，合并上層液體并使用1mol/L HCl調(diào)節(jié)pH至4～4.5，離心，取沉淀進行冷凍干燥，得牡丹籽蛋白；(2)配制1～3％牡丹籽蛋白溶液，使用胰蛋白酶超聲輔助酶解，反應(yīng)結(jié)束，沸水浴10～15min進行滅酶，即可得到牡丹籽降血糖肽。本發(fā)明進一步提出了上述牡丹籽降血糖肽的純化方法和應(yīng)用。本發(fā)明利用超聲波輔助生物酶法降解牡丹籽蛋白，將其切成多種不同分子量多肽，然后使用超濾、離子交換、葡聚糖凝膠和高效液相色譜進行分離純化，不僅可以高效的進行酶切反應(yīng)，獲得大量的牡丹籽降血糖肽，并且在純化過程能夠保持多肽活性不喪失，便于生產(chǎn)利用。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于食品生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種牡丹籽降血糖肽及其純化方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

糖尿病是一種嚴(yán)重威脅人類健康的疾病。隨著經(jīng)濟水平的飛速發(fā)展，人們的飲食越來越好，運動量日趨減少，導(dǎo)致糖尿病的發(fā)病率逐年增加。傳統(tǒng)的降血糖藥包括葡萄糖苷酶抑制劑、胰島素增敏劑、胰島素促分泌劑、中成藥、胰島素、雙胍類藥物、磺酞脲類藥物等，由于藥物治療存在副作用，長期使用患者難以接受。近年來，通過食療達到控制血糖的方法越來越受到人們的青睞，其中開發(fā)新的α-葡萄糖苷酶抑制劑是眾多學(xué)者的努力方向。

最近有學(xué)者以雜色蛤、蠶絲、蛋清和乳清等蛋白為原料，酶解制備具有抑制α-葡萄糖苷酶的活性肽。但這些多肽的活性不高，如蠶絲源降血糖多肽中分離出的兩個三肽，半抑制劑量分別為2.7mg/mL和1.5mg/mL。因此，研發(fā)新型高活性的降血糖肽是本行業(yè)重點要解決的難題。

自牡丹籽油被衛(wèi)生部正式批準(zhǔn)成為新型食用油以來，我國油用牡丹的種植面積逐年遞增，榨油后的牡丹籽粕產(chǎn)量也不斷增加，其中粗蛋白約占牡丹籽粕的28.34％(W/W)。牡丹籽蛋白含有18種天然氨基酸，其中8種人體必須氨基酸占30.44％，營養(yǎng)比例合理，具有極大的開發(fā)前景。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決上述問題，本發(fā)明提供了一種牡丹籽降血糖肽及其純化方法，采用超聲波輔助酶解牡丹籽蛋白，通過超濾、離子交換樹脂、葡聚糖凝膠進行分離純化，得到高活性的降血糖肽。不僅為牡丹籽的綜合利用提供新方法，更為重要是獲得一種新型、高活性的降血糖肽，為廣大糖尿病患者帶來福音。

技術(shù)方案：為實現(xiàn)上述技術(shù)目的，本發(fā)明的牡丹籽降血糖肽通過如下方法制備得到：

(1)將牡丹籽榨油之后得到的牡丹籽脫脂粉與水按照料液比1:8～12混合均勻，調(diào)節(jié)pH至9～9.5，40～60℃下超聲攪拌提取蛋白，然后3500～3800r/min離心10～15min，取上層液體，所得的沉淀按上述方法重復(fù)提取兩次，合并所得的上層液體，使用1mol/L HCl調(diào)節(jié)pH至4～4.5，3500～3800r/min離心10～15min，取沉淀進行冷凍干燥，即得牡丹籽蛋白；

(2)配制1～3％牡丹籽蛋白溶液，使用胰蛋白酶酶解，按照加胰蛋白酶5000～125000U/g，pH7.5～8.5，溫度35～40℃，超聲輔助酶解的時間15～25min，超聲波頻率22～40kHz，功率50～200W/L，反應(yīng)結(jié)束，沸水浴10～15min進行滅酶，即可得到牡丹籽降血糖肽。

在一個優(yōu)選的實施例中，通過如下方法制備得到牡丹籽降血糖肽溶液：

a.將原料與蒸餾水混勻，使用1mol/L的NaOH調(diào)節(jié)溶液pH至9.5，50℃水浴超聲間歇攪拌提取蛋白2h，3800r/min離心15min，所得沉淀再次提取兩次，所得上層液體使用1mol/LHCl調(diào)節(jié)pH至4.5，3800r/min離心15min，取沉淀進行冷凍干燥，即可獲得牡丹籽蛋白。