[發明專利]檢測人類BRCA1和BRCA2基因突變的引物、試劑盒及方法

有效

• 申請號: 201610134675.4
• 申請日: 2016-03-10
• 公開（公告）號: CN105586427B
• 公開（公告）日: 2020-06-19
• 發明（設計）人: 涂澤華;林清華;翁穎;康雅君;葛會娟;李旭超;阮力;鄭立謀
• 申請（專利權）人: 廈門艾德生物醫藥科技股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12Q1/6869;C12N15/11
• 代理公司: 廈門市精誠新創知識產權代理有限公司 35218
• 代理人: 秦華

本發明公開了檢測人類BRCA1和BRCA2基因突變的引物、試劑盒及方法。其上游引物為SEQ ID NO:1,3,5,7,9?193所示序列，同時其5’端加上通用引物Tag1；下游引物為SEQ ID NO:2,4,6,8,10?194所示序列，同時其5’端加上通用引物Tag2；還包括帶有P5序列和SEQ ID NO:221?236所示序列的上游引物；帶有P7序列和SEQ ID NO:197?220所示序列的下游引物。能快速、準確、簡便地檢測BRCA1和BRCA2基因全外顯子及其與內含子連接區和非翻譯區和啟動子區突變。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，尤其涉及檢測人類BRCA1和BRCA2基因突變的引物、試劑盒及方法。

背景技術

乳腺癌和卵巢癌是女性常見惡性腫瘤，一般人群中女性在其一生中罹患乳腺癌和卵巢癌的風險分別為13％和1.5％，我國近年來乳腺癌發病率高居女性惡性腫瘤的首位，并以3％以上的速度逐年遞增(Antoniou A,Pharoah PD,Narod S,et al.Average risks ofbreast and ovarian cancer associated with BRCA1 or BRCA2 mutations detectedin case series unselected for family history:A combined analysis of 22studies.American Journal of Human Genetics 2003；72(5):1117–1130)。目前認為大多數遺傳性乳腺癌是由于基因突變引起的，其中BRCA1和BRCA2基因的突變與乳腺癌發病關系較為密切。有研究表明，攜帶BRCA1或BRCA2基因致病性突變的女性在其70歲后患病風險增加了5-30倍，分別高達75％和46％(Cao W,Wang X,Li JC.Hereditary breast cancer inthe Han Chinese population.J Epidemiol.2013；23:75–84)。

BRCA1基因定位于人類染色體17q12-21，全長81K，含24個外顯子，編碼蛋白含有1863個氨基酸殘基。BRCA2基因定位于13q12.3，由27個外顯子組成，編碼蛋白含有3418個氨基酸殘基。BRCA1和BRCA2基因都是腫瘤抑制基因，參與細胞周期的調控、基因轉錄的調節、DNA損傷的修復及凋亡等重要的細胞活動。一旦BRCA1或BRCA2基因發生致病性突變，致使其無法正常編碼合成蛋白產物或合成的蛋白產物功能缺失，其抑癌作用將會受到影響，增加癌癥發生發展的危險。

2014版NCCN乳腺癌臨床指南建議：BRCA1/2基因突變的遺傳性乳腺癌高風險人群應采取必要的預防和監控措施，對于BRCA1/2基因突變陽性的患者需考慮對側癌變的高風險(NCCN Clinical Practice Guidelines version 1 2014 for breast cancer)。若對于乳腺癌/卵巢癌患者，攜帶BRCA1/2基因致病性突變會使多發病灶和對側癌變的風險增加。2014年12月，美國FDA批準抗癌新藥Olaparib(Lynparza)用于治療BRCA1或BRCA2基因突變的卵巢癌患者。近期臨床研究表明，生殖系BRCA1或BRCA2突變的多種腫瘤可以從Olaparib治療中得到緩解(Kaufman B,Shapira-Frommer R,Schmutzler RK,et al:Olaparibmonotherapy in patients with advanced cancer and a germline BRCA1/2mutation.J Clin Oncol 33:244-50,2015)。通過對BRCA1和BRCA2基因突變的檢測，可以預測乳腺癌或卵巢癌發生發展，也可以篩選出乳腺癌、卵巢癌及其他相關惡性腫瘤的高危人群，針對卵巢癌患者，更可以從抗癌新藥Olaparib中獲益。