[發明專利]一種快速檢測禽病病毒的檢測試劑盒及其檢測方法

有效

• 申請號: 201610134356.3
• 申請日: 2016-03-09
• 公開（公告）號: CN105603125B
• 公開（公告）日: 2019-07-12
• 發明（設計）人: 任濤;馮敏莎;譚陽通
• 申請（專利權）人: 華南農業大學
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70
• 代理公司: 廣東廣信君達律師事務所 44329
• 代理人: 楊曉松

本發明公開了一種快速檢測禽病病毒的檢測試劑盒及其檢測方法，屬于光譜學和分子診斷領域。本發明采用鹽酸羥胺絡合法制備的銀溶膠作為拉曼增強試劑，銀溶膠以一定比例與待測物品混合均勻后，滴在石英片上，待自然風干后，使用SmartRaman Ocean5pro便攜式拉曼光譜儀進行拉曼檢測，所獲得的拉曼光譜通過主成分分析和線性判別分析后，實現對目標病原體的定性的檢測。所述檢測試劑盒操作簡便、靈敏度高，具有良好的應用前景。

技術領域

本發明屬于光譜學和分子診斷領域，特別涉及一種快速檢測禽病病毒的檢測試劑盒及其檢測方法。

背景技術

新城疫病毒(Newcastle Disease Virus,NDV)，俗稱亞洲雞瘟，可引起雞群腹瀉、呼吸困難及神經癥狀。禽流感病毒(Avian Influenza Virus,AIV)包括多個亞型，其中H5亞型禽流感病毒能夠引起禽群大量發病和死亡，被世界動物衛生組織列為A類傳染病，受到高度重視。積極監測和控制新城疫病毒和禽流感病毒在禽群中的傳播，不僅能夠減少養殖業的損失，還能在很大程度上降低禽流感病毒從禽群傳播給人的風險，有重要的公共衛生安全意義。

目前實驗室檢測手段主要有病原學檢測、病原血清學檢測、免疫分析方法和分子生物學檢測方法。病毒的分離鑒定是確診本病最確切、最具公信力的方法，但是實驗操作步驟較為冗雜，需時較；免疫分析方法中酶聯免疫吸附試驗技術，即ELISA，是目前抗原抗體檢測領域中，應用最為廣泛的免疫學檢測方法，具有較高的特異性和敏感性，但是價格較為昂貴；熒光定量RT-PCR(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction)技術具有高度的敏感性和特異性，并且可大大縮短對病毒的檢出時間，克服了常規血清學診斷方法中非特異性因素的干擾及敏感性問題，為早期快速診斷病毒提供了敏感、快速、實用的檢測方法，但是步驟較為復雜，需要提供相應的實驗室設備。因此亟待建立一種操作簡單，快速，靈敏，無損的高通量的檢測方法。

表面增強拉曼光譜散射(Surface Enhanced Raman Scattering,SERS)是指當某些分子吸附到具有納米粗超度的貴金屬表面時，在這些粗超得到的拉曼散射信號就會別增強上百萬倍，甚至更高。由此得到的光譜被稱為“表面增強拉曼光譜”。相比其他光譜而言，如熒光光譜，紅外光譜等，表面增強拉曼光譜具有靈敏度高、譜帶窄、抗光漂白、不受水的干擾等特點，并且能夠實現快速、實時、無損檢測，因此非常適用于生物醫學的研究。

發明內容

為克服現有的檢測技術需要昂貴的儀器配備專業技術人員的問題，本發明的首要目的在于提供一種快速檢測禽病病毒的檢測試劑盒。所述的檢測試劑盒采用表面增強拉曼光譜技術，提供有一種操作簡便、靈敏度高的檢測病毒的試劑盒。

本發明的另一目的在于提供上述試劑盒的檢測方法。

本發明的目的通過下述技術方案實現：一種快速檢測禽病病毒的檢測試劑盒，包括金屬溶膠液，石英片和拉曼光譜儀。

所述的金屬溶膠液為金溶膠液或銀溶膠液。

所述的銀溶膠的制備方法如下：常溫下將2.5mL 10^-2mol/L AgNO₃加入到75mL蒸餾水中，加入5mL of 10^-2mol/L巰基乙酸；攪拌10min后滴入2.5mL10^-2mol/L NaI，攪拌20min后，得到淺綠色的AgI溶膠，加入20mg NaBH₄還原，繼續攪拌約10min，生成黃褐色銀溶膠，得到的是形狀均一的球形粒子，平均粒徑約35nm，濃度約為120μg/mL。

所述的石英片為波數范圍是700-2000cm^-1無明顯拉曼峰的基底石英片；

所述的石英片亦可有玻璃片代替。

所述的拉曼光譜儀為SmartRaman Ocean5pro便攜式拉曼光譜儀。