[發(fā)明專利]應(yīng)用高速逆流色譜分離功勞木中生物堿類化合物的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610133474.2
• 申請(qǐng)日: 2016-03-09
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN105732611B
• 公開(kāi)（公告）日: 2017-05-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王岱杰;耿巖玲;王曉;趙恒強(qiáng);于金倩;段文娟;閆慧嬌
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 山東省分析測(cè)試中心
• 主分類號(hào): C07D455/03
• 分類號(hào): C07D455/03
• 代理公司: 濟(jì)南圣達(dá)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司37221
• 代理人: 曹麗

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及中藥有效成分的分離純化方法，具體為應(yīng)用高速逆流色譜分離功勞木中生物堿類化合物(藥根堿、小檗堿、巴馬汀、非洲防己堿單體)的方法。

技術(shù)背景

功勞木為小檗科植物闊葉十大功勞Mahoniabealei(Fort.)Carr或細(xì)葉十大功勞Mahoniafortunei(Lindl.)Fedde的干燥莖，其性味苦，寒，具有清熱燥濕、瀉火解毒之功效。主治濕熱瀉痢、黃疸尿赤、目赤腫痛、胃火牙痛，瘡癤癰腫。功勞木中生物堿類化合物主要為異喹啉類生物堿，包括藥根堿、巴馬汀和小檗堿，研究結(jié)果表明異喹啉類生物堿可以抑制自由基和脂氧合酶活性從而達(dá)到抗炎的作用。此外，生物堿的抗氧化能力還與其抗病性、抗逆性及延緩衰老有關(guān)。現(xiàn)代藥理研究表明，功勞木還具有一定的逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞耐藥的作用。

現(xiàn)有關(guān)于功勞木中生物堿類單體化合物分離制備的文獻(xiàn)方法主要采用反復(fù)硅膠柱層析和Sephadex LH-20凝膠柱色譜，其局限性是費(fèi)時(shí)費(fèi)力、污染環(huán)境、樣品純度低，而且反復(fù)柱層析對(duì)樣品有不可逆性吸附作用，分離得到生物堿單體制備效率低、成本較高，難以發(fā)展成為制備量大的分離技術(shù)。

高速逆流色譜(High-speed Counter-current Chromatography，HSCCC)是近30年發(fā)展起來(lái)的一種連續(xù)的無(wú)需任何固體支持物的高效、快速的液液分配色譜分離技術(shù)，它避免了固態(tài)支持體或載體帶來(lái)的樣品易被死吸附、損耗和變性等各種問(wèn)題，使用其它液相色譜法進(jìn)行制備型分離時(shí)，其分配效率會(huì)顯著降低，溶劑消耗量大，HSCCC保證較高峰型分辨度，分離量大、樣品無(wú)損失、回收率高、分離環(huán)境緩和，節(jié)約溶劑。高速逆流色譜能直接進(jìn)大量粗提樣品或合成混合物，分離結(jié)果能達(dá)到相當(dāng)高的純度，已廣泛應(yīng)用于生物、醫(yī)藥、環(huán)保等領(lǐng)域化學(xué)物質(zhì)的制備分離和純化。

雖然現(xiàn)有技術(shù)中有利用高速逆流色譜分離中藥中生物堿的報(bào)道，本領(lǐng)域公知，高速逆流色譜分離中所用到的溶劑系統(tǒng)是影響分離結(jié)果的關(guān)鍵因素之一，常用到的溶劑有甲醇、石油醚、乙酸乙酯、正己烷、丙酮、氯仿、乙腈等，每一溶劑系統(tǒng)中所使用的溶劑至少為兩種，不同中藥成分所具有的成分，以及生物堿的種類和數(shù)量不一樣，中藥經(jīng)過(guò)提取得到的生物堿總樣的成分不同，所以針對(duì)不同的中藥如何選擇溶劑系統(tǒng)的溶劑種類、各溶劑之間的用量比例以及配合該溶劑系統(tǒng)選擇怎樣的流速、上樣量、轉(zhuǎn)速等等才能得到純度較高的生物堿單體是沒(méi)有參考價(jià)值的。

非洲防己堿具有興奮子宮的作用，目前已知的來(lái)源為小檗科植物日本小檗Berberis thunbergii DC根莖、毛茛科植物黃連Coptis chinensis Franch根莖、防己科植物黃藤Fibraurea tinetoria Lour根、非洲掌葉防己Jatrorrhiza palmata(DC.)Miers(J.columba.Miers)、罌粟科植物博克尼木Bocconia frutesces Linn葉、番荔枝科植物依南木Enantia chlorantha Oliver根。

目前，還沒(méi)有從功勞木中分離出非洲防己堿的有關(guān)報(bào)道，也沒(méi)有利用高速逆流色譜分離功勞木中生物堿的記載。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的就是為了解決上述問(wèn)題，提供一種應(yīng)用高速逆流色譜分離功勞木中生物堿類化合物的方法。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

一種分離功勞木中生物堿類化合物的方法，應(yīng)用高速逆流色譜分離，所述分離中所用到的條件是：溶劑系統(tǒng)為氯仿：甲醇：0.5mol·L^-1鹽酸溶液＝3.5-4.5:1-2:1.5-2.5(優(yōu)選：4:1.5:2)，高速逆流色譜儀柱體積為200-400(優(yōu)選300mL)，上樣量200-500(優(yōu)選300mg)，轉(zhuǎn)速300-1000rpm(優(yōu)選800rpm)，上相為固定相，下相為流動(dòng)相，流速1.5-2.5mL/min(優(yōu)選2.0mL/min)，固定相保留率71.67％，檢測(cè)波長(zhǎng)250-260nm(優(yōu)選254nm)。

所述：功勞木中生物堿類化合物的提取方法：(1)采用乙醇對(duì)功勞木藥材進(jìn)行提取，將提取液真空濃縮至無(wú)醇味，得總提取物；(2)將總提取物調(diào)至酸性，石油醚萃取脫脂后，調(diào)整至堿性，攪拌沉淀，即為功勞木生物堿粗提物。

應(yīng)用高速逆流色譜分離的具體步驟如下：

(1)將溶劑系統(tǒng)，置于分液漏斗中，搖勻后靜置分層，待平衡一段時(shí)間后將上下兩相分開(kāi)，上相為固定相，下相為流動(dòng)相；