[發明專利]一種銀納米花雜化的硫化鉬多壁碳納米管傳感器的制備方法及應用

有效

• 申請號: 201610132406.4
• 申請日: 2016-03-09
• 公開（公告）號: CN105606677B
• 公開（公告）日: 2018-02-23
• 發明（設計）人: 李月云;董云會;劉會;王平;韓健;劉青;陳磊;李德剛;張道鵬
• 申請（專利權）人: 山東理工大學
• 主分類號: G01N27/327
• 分類號: G01N27/327;G01N33/574
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于新型功能納米材料、免疫分析和生物傳感技術領域，提供了一種銀納米花雜化的硫化鉬多壁碳納米管免疫傳感器的制備方法及應用。

背景技術

腫瘤標志物是腫瘤細胞產生和釋放的以抗原、酶、激素等形式的代謝產物存在于腫瘤細胞內或宿主體液中，其在臨床上對于隨原發腫瘤的發現，腫瘤高危人群的篩選、良性和惡性腫瘤的鑒別診斷、腫瘤發展程度的判斷，腫瘤的治療效果的觀察和評價及腫瘤復發和預后的預測產生極大的影響，引起人們的廣泛關注。

鱗狀細胞癌腫瘤標志物，對于子宮頸癌、肺鱗癌、食道癌、肛門癌、皮膚癌、口腔癌等鱗狀上皮細胞癌的診斷監測都能起到一定的作用。電化學免疫傳感器結合了高特異性的免疫分析技術和高靈敏的電化學分析技術，具有靈敏度高、制備簡單、檢測快速、成本低等優點，在臨床檢驗、環境監測、食品安全控制、生物監測等領域都有重要的應用價值。

氨基化石墨烯納米帶具有大量的氨基，可以和金納米粒子生成穩定的金氨鍵，從而在其表面可以固載大量的金納米粒子。金納米粒子的加入不僅可以增加材料的導電性，而且還可以牢固的將抗體固載在電極表面，從而提高該免疫傳感器的靈敏度。

發明內容

本發明提供了一種銀納米花雜化的硫化鉬多壁碳納米管傳感器的制備方法及應用，實現了對鱗狀細胞癌腫瘤標志物的超靈敏檢測。

本發明的目的之一是提供一種銀納米花雜化的硫化鉬多壁碳納米管免疫傳感器的制備方法。

本發明的目的之二是將所制備的銀納米花雜化的硫化鉬多壁碳納米管免疫傳感器，用于檢測鱗狀細胞癌腫瘤標志物。

本發明的技術方案，包括以下步驟。

1.一種銀納米花雜化的硫化鉬多壁碳納米管傳感器的制備方法，步驟如下：

（1）將直徑為3 ~ 5mm的玻碳電極用Al₂O₃拋光粉打磨，超純水清洗干凈；

（2）取6μL、0.5 ~ 2mg/mL的負載金納米粒子的石墨烯納米帶滴加到電極表面，室溫下晾干，超純水沖洗電極表面，晾干；

（3）繼續將6μL、8 ~ 12μg/mL的鱗狀細胞癌腫瘤標志物捕獲抗體滴加到電極表面，超純水沖洗，4 ^oC冰箱中干燥；

（4）繼續將3μL、0.5 ~ 1.5mg/mL的BSA溶液滴加到電極表面，用以封閉電極表面上非特異性活性位點，超純水沖洗電極表面，4 ^oC冰箱中晾干；

（5）繼續滴加6μL、0.001 ~ 20ng/mL的一系列不同濃度的鱗狀細胞癌腫瘤標志物抗原溶液，超純水沖洗電極表面，4^oC冰箱中干燥；

（6）將6μL、1 ~ 3mg/mL的銀納米花雜化的硫化鉬多壁碳納米管檢測抗體孵化物溶液，滴涂于電極表面上，置于4^oC冰箱中晾干，制得一種銀納米花雜化的硫化鉬多壁碳納米管傳感器。

2.負載金納米粒子的石墨烯納米帶的制備，步驟如下：

（1）金納米粒子的制備

將4.0~4.3mL、質量分數為1%的氯金酸和95.8mL超純水加入到250mL三口燒瓶中，加熱至沸騰，在磁力攪拌下加入10mL、38.8mmol·L^-1的檸檬酸鈉溶液 ，持續攪拌并回流15min，直至溶液變為酒紅色不再改變，離心分離，棄去沉淀，得到的上清液即為金納米粒子溶液；

（2）氨基化石墨烯納米帶的制備

將30 ~ 50mg 多壁碳納米管超聲分散在30mL的濃硫酸中活化10 ~ 14h，然后加入150 ~ 250mg 高錳酸鉀，室溫下攪拌1h，然后在55^oC的水浴鍋里加熱30min，后將水浴鍋溫度升高至65^oC，繼續加熱4h，后將水浴鍋溫度升高至70^oC，繼續加熱10 ~ 20min，冷卻至室溫；將得到的懸濁液倒入400mL超純水結成的冰中，攪拌下加入5 ~ 9mL、30%的雙氧水，待冰完全融化后，離心除去上清液，所得固體即為石墨烯納米帶，用超純水和乙醚分別洗滌三次，60^oC恒溫干燥12~16h，冷卻至室溫備用；