[發(fā)明專利]一種水稻非胚乳表達啟動子SAFES3及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610131246.1
• 申請日: 2016-03-08
• 公開（公告）號: CN105567695B
• 公開（公告）日: 2019-08-13
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 秦瑞英;楊劍波;李莉;魏鵬程;李浩;李娟;楊亞春;許蓉芳
• 申請（專利權(quán)）人: 安徽省農(nóng)業(yè)科學(xué)院水稻研究所
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/82;C12N15/84;A01H5/00;A01H6/46
• 代理公司: 北京律譜知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11457
• 代理人: 黃云鐸

1.一種水稻非胚乳表達啟動子SAFES3，其特征在于，所述水稻非胚乳表達啟動子SAFES3由：

(a)SEQ ID NO.1中所示的核苷酸序列；或者

(b)SEQ ID NO.2中所示的核苷酸序列構(gòu)成，

SEQ ID NO.1中所示的核苷酸序列為：

SEQ ID NO.2中所示的核苷酸序列為：

2.一種表達盒，其特征在于，所述表達盒包含權(quán)利要求1所述的水稻非胚乳表達啟動子SAFES3。

3.一種重組表達載體，其特征在于，所述重組表達載體包含權(quán)利要求1所述的水稻非胚乳表達啟動子，在所述重組表達載體中，所述水稻非胚乳表達啟動子SAFES3連接于載體中待表達的基因序列的上游。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的重組表達載體，其特征在于，所述待表達的基因為Gus基因，所述重組表達載體為pCAMBIA1391-SAFES3，其中pCAMBIA1391為作物雙元表達載體；或者所述待表達基因是具有改善非胚乳組織性狀功能的基因。

5.一種根據(jù)權(quán)利要求1所述的水稻非胚乳表達啟動子SAFES3在培育轉(zhuǎn)基因水稻中的應(yīng)用，其特征在于，所述應(yīng)用包括：將權(quán)利要求1所述的水稻非胚乳表達啟動子連接于載體中待表達的基因序列上游，從而構(gòu)建重組表達載體；將所述重組表達載體轉(zhuǎn)化到水稻細胞、組織或器官中進行培育。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于，所述應(yīng)用包括：

利用序列表SEQ ID No.3和4中的引物，以水稻品種日本晴DNA為模板，擴增權(quán)利要求1所述的水稻非胚乳表達啟動子SAFES3；

回收目的片段，將其連接到PGEM-T-Easy載體上，按照熱激法轉(zhuǎn)化大腸桿菌XL-Blue感受態(tài)細胞后，使感受態(tài)細胞激活，進而將目的片段轉(zhuǎn)入到激活的感受態(tài)細胞中，然后，經(jīng)菌落PCR篩選獲得陽性克隆，挑取單克隆搖菌液提質(zhì)粒，用SalI和EcoRI進行雙酶切驗證，驗證正確的克隆即為所要獲得的啟動子SAFES3；

從上面獲得的陽性克隆中提取質(zhì)粒，用SalI和EcoRI雙酶切，回收啟動子SAFES3片段；

并利用SEQ ID No.3和4中所示引物對含有目標(biāo)基因的載體進行線性化處理、回收載體，將上述的SAFES3片段和載體片段用T4連接酶進行連接，得到啟動子SAFES3與目標(biāo)基因融合的作物表達載體，利用凍融法將作物表達載體轉(zhuǎn)入根癌農(nóng)桿菌；

利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)方法，對水稻種子，采用上面所獲得的轉(zhuǎn)入了重組表達載體的根癌農(nóng)桿菌進行農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化，獲得相應(yīng)水稻植株。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于，所述目標(biāo)基因為具有改善水稻植株中非胚乳部位性能的基因。