[發明專利]一種強表達活性的水稻非種子表達啟動子SAFES4及其應用

有效

• 申請號: 201610131243.8
• 申請日: 2016-03-08
• 公開（公告）號: CN105567694B
• 公開（公告）日: 2019-08-13
• 發明（設計）人: 魏鵬程;楊劍波;李莉;李浩;李娟;許蓉芳;楊亞春;秦瑞英
• 申請（專利權）人: 安徽省農業科學院水稻研究所
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/82;C12N15/84;A01H5/00;A01H6/46
• 代理公司: 北京律譜知識產權代理事務所(普通合伙) 11457
• 代理人: 黃云鐸

1.一種強表達活性的水稻非種子表達啟動子SAFES4，其特征在于，所述強表達活性的水稻非種子表達啟動子SAFES4由SEQ ID NO:1中所示的核苷酸序列構成，

SEQ ID NO:1中所示的核苷酸序列為：

2.一種表達盒，其特征在于，所述表達盒包含權利要求1所述的強表達活性的水稻非種子表達啟動子SAFES4。

3.一種重組表達載體，其特征在于，所述重組表達載體包含權利要求1所述的強表達活性的水稻非種子表達啟動子，在所述重組表達載體中，所述強表達活性的水稻非種子表達啟動子連接SAFES4于載體中待表達的基因序列的上游。

4.根據權利要求3所述的重組表達載體，其特征在于，所述待表達的基因為Gus基因，所述重組表達載體為pCAMBIA1391-SAFES4，其中pCAMBIA1391為作物雙元表達載體。

5.根據權利要求4所述的重組表達載體，其特征在于，所述待表達基因是具有改善非種子性狀功能的基因。

6.一種根據權利要求1所述的強表達活性的水稻非種子表達啟動子SAFES4在培育轉基因水稻中的應用，其特征在于，所述應用包括：將權利要求1所述的強表達活性的水稻非種子表達啟動子連接于載體中待表達的基因序列上游，從而構建重組表達載體；將所述重組表達載體轉化到水稻細胞、組織或器官中進行培育。

7.根據權利要求6所述的應用，其特征在于，所述應用包括：

利用序列表SEQ ID No.2和3中的引物，以水稻品種日本晴DNA為模板，擴增權利要求1所述的水稻非胚乳表達啟動子SAFES4；

回收目的片段，將其連接到PGEM-T-Easy載體上，按照熱激法轉化大腸桿菌XL-Blue感受態細胞后，使感受態細胞激活，進而將目的片段轉入到激活的感受態細胞中，然后，經菌落PCR篩選獲得陽性克隆，挑取單克隆搖菌液提質粒，用引物進行雙酶切驗證，驗證正確的克隆即為所要獲得的啟動子SAFES4；

從上面獲得的陽性克隆中提取質粒，用引物雙酶切，回收啟動子SAFES4片段；

并利用SEQ ID No.2和3中所示引物對含有目標基因的載體進行線性化處理、回收載體，將上述的SAFES3片段和載體片段用T4連接酶進行連接，得到啟動子SAFES4與目標基因融合的作物表達載體，利用凍融法將作物表達載體轉入根癌農桿菌；

利用農桿菌介導方法，對水稻種子，采用上面所獲得的轉入了重組表達載體的根癌農桿菌進行農桿菌介導的遺傳轉化，獲得相應水稻植株。