[發明專利]抗人肺炎鏈球菌fam1家族PspA蛋白抗體及應用該抗體的免疫層析試劑盒

有效

• 申請號: 201610129944.8
• 申請日: 2016-03-08
• 公開（公告）號: CN105753982B
• 公開（公告）日: 2019-10-08
• 發明（設計）人: 胡征;董俊;楊波
• 申請（專利權）人: 湖北工業大學;湖北華龍生物制藥有限公司
• 主分類號: C07K16/12
• 分類號: C07K16/12;G01N33/569;G01N33/558;G01N33/532
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所 42001
• 代理人: 余曉雪;王敏鋒

本發明涉及抗人肺炎鏈球菌fam1家族PspA蛋白抗體及應用該抗體檢測人肺炎鏈球菌的免疫層析試劑盒，抗人肺炎鏈球菌fam1家族PspA蛋白抗體是分別識別人肺炎鏈球菌fam1家族PspA蛋白71?84位以及357?370位氨基酸所組成的兩個線性抗原表位的抗體，人肺炎鏈球菌fam1家族PspA蛋白在GenBank序列號是AAF27703.1；人肺炎鏈球菌fam1家族PspA蛋白71?84位以及357?370位的氨基酸序列分別為KAAQKKYDEDQKKT及APKPEKPAEQPKAE。本發明所提供的兩種兔抗人肺炎鏈球菌fam1家族PspA蛋白抗體具有特異性好、純度高、效價高、制備成本低廉的特點。

技術領域

本發明屬于生物醫學技術領域，涉及抗人肺炎鏈球菌fam1家族PspA蛋白抗體及應用該抗體檢測人肺炎鏈球菌的免疫層析試劑盒。

背景技術

人肺炎鏈球菌(Streptococcus pneumoniae，Sp)是兒童呼吸道感染的重要病原體。主要經飛沫傳播而進入呼吸道，從而寄生于人體的鼻咽部，或侵入人體不易清除的部位引起一系列的疾病，如大葉性肺炎，腦膜炎，支氣管炎，中耳炎等。它是全球所有年齡組高發病率和病死率的主要病原菌。其中，在發展中國家，嬰幼兒、老年人及免疫缺陷人群中尤為嚴重。肺炎鏈球菌于1881年首次由巴斯德(Louis Pasteur)及G.M.Sternberg分別在法國及美國從患者痰液中分離出。其為革蘭氏染色陽性，菌體似矛頭狀，成雙或成短鏈狀排列的雙球菌，有毒株菌體外有化學成分為多糖的莢膜。其莢膜具有抗原性，是肺炎鏈球菌分型的依據。根據莢膜多糖抗原性的不同將肺炎球菌分為91個血清型。其菌體抗原主要為C多糖，其存在于肺炎鏈球菌細胞壁中，具有種特異性，為各型菌株所共有。C多糖可被血清中C-反應蛋白沉淀。在鈣離子存在時，C多糖可與正常人血清中稱為C-反應蛋白(C reactiveprotein,CRP)的β球蛋白結合，發生沉淀。目前針對人肺炎鏈球菌抗原的檢測亦主要是針對此抗原，而該抗原非肺炎鏈球菌獨有，如緩和鏈球菌亦含有該抗原。并且C多糖的提純過程困難，造成生產成本較高。在肺炎鏈球菌表面還有一種與毒力相關的重要抗原，為肺炎鏈球菌表面蛋白A(PspA)，其存在于所有肺炎鏈球菌血清型中，是肺炎鏈球菌的特異性抗原。PspA分為3個家族，其中具有Fam1或Fam2家族PspA蛋白的人肺炎鏈球菌占到了臨床分離的人肺炎鏈球菌種類的99％以上。

臨床病人由于不同的呼吸道病原體(如肺炎支原體、流感嗜血桿菌、流感病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒等)感染引起疾病癥狀可以十分相似，這導致了流行診斷比較困難，確診往往依賴于實驗室診斷。快速有效的診斷方法應該是在疾病的發病初期就可以得到明確的診斷，便于實施針對性的治療，阻止病情的發展遷延。

盡管肺炎鏈球菌在全球范圍內傳播，嬰幼兒的感染尤其普遍，但可用于實驗室診斷的標準化商品試劑的種類極少。目前，肺炎鏈球菌的檢測主要有以下幾種方法：

一、常規實驗室檢測

1、細菌分離

實驗室診斷肺炎鏈球菌的金標準是分離人肺炎鏈球菌毒株。采用鼻咽分泌物作為病原體分離的標本，可以用血培養的方法分離病原體。但是該法有嚴重的缺陷，因為肺炎鏈球菌是苛養菌，營養要求高，培養所需時間長，陽性率低，更重要的是，若采樣前患者使用過抗菌藥物，會造成培養結果的假陽性。這樣在臨床方面對病人的治療就有一定的局限性。

2、血清學檢測

即采用酶聯免疫法、放免法、微量免疫熒光法等，檢測被檢者血清中肺炎鏈球菌抗體水平，可間接提示肺炎鏈球菌感染的存在。然而，血清學試驗只能提供一種回顧性的診斷，它需要同時檢測患者急性期和恢復期的雙份血清，如果恢復期中抗人肺炎鏈球菌抗體效價比急性期高4倍或4倍以上才有診斷意義。另外，抗體出現的時機不易掌握，且因為菌體血清型種類過多，導致其誘生的抗莢膜多糖抗體種類過多，對抗體的檢測造成了很大的困難，故現有血清學方法的檢測質量受到一定限制。

二、快速診斷