[發明專利]一種青天葵球莖組織培養快速繁殖方法

在審

• 申請號: 201610129862.3
• 申請日: 2016-03-08
• 公開（公告）號: CN105746350A
• 公開（公告）日: 2016-07-13
• 發明（設計）人: 韋坤華;李林軒;繆劍華;徐建平;黃寶優;凌怔柱;韋瑩
• 申請（專利權）人: 廣西壯族自治區藥用植物園
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 廣西南寧公平專利事務所有限責任公司 45104
• 代理人: 黃永校

技術領域

本發明涉及植物組織培養繁殖技術領域，具體是一種青天葵球莖組織培養快速繁殖方法。

背景技術

青天葵為蘭科植物毛唇芋蘭Nerviliafordii(Hance)Schitr的葉或帶球莖的葉，又名獨葉蓮、獨腳蓮、珍珠葉、墜千斤、鐵帽子、山米子、青蓮。性平，味苦，甘、涼。有清肺止咳，健脾消積，清熱解毒，消結散疬等功效，主治肺癆咯血，肺熱咳嗽，小兒肺炎，急性喉炎，口腔炎，咽喉腫痛，瘰疬，瘡瘍腫毒，跌打損傷等。青天葵是廣西特產藥材，也是我國出口創匯主要藥材，供應緊張且經濟價值較高，主產于廣西、廣東、四川、云南，屬于多年生宿根小草本，該物種瀕臨近危，已列入中國物種紅色名錄。通過栽培試驗比較，發現青天葵組培球莖不僅能正常生長，而且在相同條件下栽培組培球莖優于野生球莖。

為了解決青天葵產業發展中中種源短缺的問題，我們利用現代生物技術通過優化青天葵組織培養條件，為青天葵組織培養規模化生產育苗提供技術支撐，從而更好的開發和利用青天葵藥用植物資源。

發明內容

本發明的目的是提供一種青天葵球莖組織培養快速繁殖方法，它能夠快速繁殖出大量優質球莖，經過煉苗移栽后快速繁育出大量成活率高的優良青天葵種苗、滿足生產需要。

本發明通過以下技術方案達到上述目的：一種青天葵球莖組織培養快速繁殖方法，包括以下步驟：

(1)外植體的取材與消毒：青天葵球莖作為外植體進行消毒，首先將1-2滴洗潔精滴入裝有50ml自來水的燒杯中，把外植體放入燒杯輕輕攪拌5min，再用棉花清洗外植體表面污垢，自來水輕微流水沖洗8-10min；移置超凈工作臺，用75v/v％乙醇浸泡30s，無菌水沖洗一遍，然后再用添加了1-2滴吐溫-20的50ml濃度為0.1v/v％升汞消毒6-8min、無菌水沖洗3-5次，獲得無菌外植體，其中無菌水為經高高溫壓滅菌的蒸餾水；

(2)無菌根狀莖的獲取：將消毒好的外植體置于誘導培養基中進行不定芽誘導，發芽得到無菌根狀莖，所述誘導培養基是以1/2MS為基本培養基，添加5g·L^-1瓊脂，30g·L^-1蔗糖，1.5mg·L^-1的6-芐基腺嘌呤，0.3mg·L^-1的吲哚乙酸，培養基pH值為5.8，培養條件為：溫度為22-24℃，光照強度1500-2000lux，光照時間為10-12h/d，培養時間為15-20d；

(3)根狀莖繁殖及球莖誘導一體化培養：切取2-3cm的無菌根狀莖置于添加5g·L^-1瓊脂，20g·L^-1蔗糖，1.0-2.0mg·L^-1的6-芐基腺嘌呤、0.1-0.5mg·L^-1的激動素(KT)、0.1-0.5mg·L^-1的吲哚乙酸、馬鈴薯汁100-200g·L^-1的1/2MS培養基中培養獲得球莖，培養基pH值為5.8，培養條件為：溫度為22-24℃，光照強度1500-2000lux，光照時間為10-12h/d，培養時間為30d；

(4)球莖煉苗移栽：球莖進行煉苗后移植于基質中培養，再移栽至大田。

步驟(4)中的煉苗移栽按以下操作進行：經過步驟(3)獲得球莖，在室溫為23-25℃的室內進行煉苗，并在瓶中加水淹沒培養基，煉苗5-7d，取出球莖，洗凈培養基，再放入ABT生根粉配成100mg/·L^-1的溶液中浸泡30min,浸泡后移栽到基質中生長30-40d，再移栽至大田。

所述基質為按泥炭土：黃沙＝1：1的比例混合。

本發明的突出優點在于：

(1)通過生物技術對青天葵球莖進行組織培養快速繁殖，在短時間內培育出大量可供大田栽培的青天葵種苗，顯著提高了青天葵種苗的繁殖系數和種苗質量，實現規模化生產，滿足生產上的需要。

(2)通過根狀莖繁殖及球莖誘導一體化培養進行青天葵球莖的繁殖，縮短了培養時間，減少培養步驟，降低了培養成本，提高了青天葵種苗的生產效率。

(3)根狀莖繁殖及球莖誘導一體化培養30天后，球莖誘導系數達到13.2～15.8，移栽基質后成活率在88.3～93％，有效解決了青天葵的規模化育苗問題。

具體實施方式

下面結合實施例對本發明的技術方案進一步說明。

實施例1

本發明所述的青天葵球莖組織培養快速繁殖方法的一個實例，包括如下步驟：