[發明專利]一種水產蛋白-植物蛋白復合型活性肽的制備方法

在審

• 申請號: 201610129680.6
• 申請日: 2016-03-09
• 公開（公告）號: CN105624249A
• 公開（公告）日: 2016-06-01
• 發明（設計）人: 洪鵬志;劉喚明;朱潘紅;周春霞;楊萍
• 申請（專利權）人: 廣東海洋大學
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C12P21/00;C12R1/125
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種水產蛋白-植物蛋白復合型活性肽的制備方法，屬于水產品加工 與利用領域。

背景技術

蛋白質酶解的后的產物小肽不但容易消化、吸收，而且還具有抗高血壓、抗膽固 醇、抗血栓形成、改善脂質代謝、增強人體體能、幫助恢復疲勞、促進鈣磷和其它微量元素的 吸收、促進大腦發育、提高記憶力、增強巨噬細胞和B細胞活力、增強免疫功能、保護表皮細 胞、防止黑色素沉淀、消除體內自由基等功效。

關于水產蛋白活性肽的制備，國內進行了大量的研究。目前，水產蛋白活性肽的制 備方法主要有自溶酶解、酶解法、液態發酵法和固態發酵與液態酶解相結合的方法這四種。 專利申請200810195646.4“內源酶制備生物活性小肽的工藝”公開了一種利用海洋低值魚 體內的內源酶自溶酶解的方法制備水產蛋白生物活性小肽的方法。專利申請 201410145196.3“一種制備扇貝裙邊活性肽的方法”公開了一種酶解法制備水產蛋白活性 肽的方法。專利申請CN102028091A“一種納豆菌發酵法制備低分子魚肽的方法”公開了一種 液體發酵法制備魚蛋白肽的方法，專利申請201210539941.3“一種由魚蛋白肽和與大豆肽 組成的蛋白肽的生產方法”公開了一種由固態發酵與液態酶解相結合制備水產蛋白活性肽 的方法。

現有的水產蛋白活性肽制備技術中存在以下缺陷。首先，現有的水產蛋白活性肽 制備技術中都有高溫處理的過程。以上制備技術中都有高溫滅酶這一工序；微生物發酵的 方法原料需要滅菌。以上這些高溫處理，會在一定程度減弱制備的功能肽或水產蛋白本身 所含其它功能性成分中的生物學活性；另外高溫處理過程，會增強美拉德，使得酶解液顏色 變深，為成品加工過程增加了負擔。其次，外加酶酶解的方法需要外加蛋白酶，增加了成本； 自溶酶解由于內源酶的不足，導致酶解不徹底。另外，微生物發酵法雖然不用外加蛋白酶， 但是原料需要滅菌導致內源酶失活，不能充分地有效利用內源酶。

發明內容

針對現有的水產蛋白活性肽制備技術存在的問題。本發明的主要目的是提供一種 低溫的制備水產蛋白活性肽的方法，以便更好地保留制備的功能肽和水產蛋白本身所含功 能性成分的生物學活性。本發明的另一目的是提供一種發酵法制備活性肽的方法，使得微 生物發酵與內源酶酶解過程能有機結合在一起。本發明還有一目的是簡化活性肽的制備工 序，降低其生產成本。

為了解決上述問題，本發明所采用的技術方案如下：一種水產蛋白-植物蛋白復合 型活性肽的制備方法，包括如下步驟：

（1）將斜面保藏的能產耐高溫蛋白酶的枯草芽孢桿菌（Bacillussubtilis）HL-2接入 到滅菌后冷卻的LB液體培養基中，于55℃、150r/min培養12h，制備成枯草芽孢桿菌 （Bacillussubtilis）HL-2種子液備用；

（2）將新鮮的水產蛋白絞碎后備用，將植物蛋白粉碎后過60目篩備用；

（3）將步驟（2）制得的絞碎水產蛋白和粉碎的植物蛋白按質量比為0.5~1.5：1的比例混 合，并加營養物和水混勻，獲得最終水分含量控制在40%～80%范圍內的發酵培養基；

（4）往步驟然（3）制得的發酵培養基上接入步驟（1）所制備的枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）HL-2種子液，并混勻；

（5）固態發酵：將步驟（4）獲得的加入菌的發酵培養基按照下列方法進行發酵：發酵培 養基分裝在已消毒的發酵淺盤中，裝料厚度為4cm～8cm，淺盤中發酵培養基表面覆蓋已滅 菌的濕紗布，再將淺盤置于已滅菌的固體發酵房內的擱架上發酵，控制環境溫度在50℃~55 ℃，發酵時間為38h～48h；

（6）液態酶解：將步驟（5）得到固態發酵產物與水按質量比為1：3的比例混合，并攪拌均 勻后加入到酶解罐中，控制酶解溫度為55℃，酶解2h；

（7）成品的加工：將步驟（6）得到的液態酶解產物進行過濾去除沉淀得到酶解液；酶解 液通過截留分子量為5000道爾頓的超濾膜的超濾去除大分子蛋白質而得到透過液；透過液 然后通過截留分子量為200道爾頓的納濾膜的納濾去除氨基酸而得到濃縮液；濃縮液經過 冷凍干燥而得到活性肽成品。