[發明專利]一種用間歇光兩步法培養洛氏角毛藻的方法

在審

• 申請號: 201610127345.2
• 申請日: 2016-03-08
• 公開（公告）號: CN105543100A
• 公開（公告）日: 2016-05-04
• 發明（設計）人: 王培磊;呂慎金;劉笑天;李愛水
• 申請（專利權）人: 臨沂大學
• 主分類號: C12N1/12
• 分類號: C12N1/12;C12R1/89
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種用于間歇光兩步法培養洛氏角毛藻的培養液，其特征在于，洛氏角毛藻培養液由以下 重量份數的原料組成：尿素0.01-0.03份，氯化銨0.03-0.05份，碳酸銨0.6-0.8份，工業 氨水(含氨25％-28％)1.2-1.5份，過磷酸鈣0.1-0.2份，磷酸二氫鉀0.05-0.08份，丙酸 鈣0.2-0.5份，硅酸鉀0.03-0.07份，氯化鐵0.003-0.006份，草酸鈦0.07-0.09份，重鉻 酸鉀0.0004-0.0008份，五氧化二釩0.005-0.009份，維生素B10.00001-0.00002份，維生 素B120.005-0.007份，維生素H0.0006-0.0008份，葉酸0.0004-0.0008份，肌醇0.002-0.004 份，復合中草藥液1.5-2.7份，吲哚乙酸0.0001-0.0004份，磁化海水1000份；其中復合中 草藥液制備方法：按重量比取當歸3-6份，陳皮4-9份，金銀花1-3份，杜仲5-7份，丹參7-9 份，純凈水1000份，加熱，煮沸，然后文火繼續煮沸3分鐘，停火，冷卻到室溫，棄藥渣， 取藥液。

2.根據權利要求1所述的一種用于間歇光兩步法培養洛氏角毛藻的培養液培養洛氏角毛藻的 方法，其特征在于，洛氏角毛藻的第一步培養方法，采用容量瓶培養；取一透明、玻璃質、 容積為1000毫升的容量瓶，洗刷干凈，用蒸餾水潤洗3遍，加入權利要求1所述的洛氏角毛 藻培養液500毫升，取處于指數生長期、干凈、無污染、生長旺盛的洛氏角毛藻藻種接種， 接種密度2.5萬個細胞/毫升，輕輕搖勻，去掉容量瓶瓶塞，用雙層、干凈的報紙和橡皮筋封 住瓶口；把此容量瓶連同其中的藻液一起放進光照培養箱中培養，共培養8天，前4天，培 養箱設置光照強度3500lux，溫度24℃，光暗周期設為L15min+D15min，即15分鐘光照，15 分鐘黑暗，然后再15分鐘光照，15分鐘黑暗，循環往復；后4天，設置光照強度6000lux， 溫度25℃，光暗周期設為L30min+D30min，即30分鐘光照，30分鐘黑暗，然后再30分鐘光 照，30分鐘黑暗，循環往復；到第5天，添加步驟1所述的新鮮培養液35毫升，以補充因 生長繁殖消耗掉的營養鹽，到第7天，添加蒸餾水25毫升，補充揮發掉的水分并稀釋藻液； 整個培養期間，每天手動搖瓶6次，即每隔4小時搖動一次，每次30秒鐘；到第8天末，藻 細胞密度可達150±20萬個細胞/毫升，停止培養，取下橡皮筋和報紙，將藻液從瓶口倒出， 此藻液作為下一級培養的藻種；

洛氏角毛藻的第二步培養方法，采用萬用瓶培養；萬用瓶的制作方法：取一白色、透明、5000 毫升的三角燒瓶，洗刷干凈，再采用消毒劑浸泡消毒20分鐘，所述消毒劑為中草藥復合消毒 劑；所述中草藥復合消毒劑組成成分(重量份數比)：紅背菜2-4份，魚腥草6-9份，柴胡 5-8份，連錢草7-12份，藿香10-15份，蒼術7-12份，地膚子8-15份，紫花地丁5-7份， 麥冬3-6份，板藍根0.5-0.9份，百部10-14份，穿心蓮5-8份，蒲公英2-6份，桑黃1-3 份；所述中草藥復合消毒劑制備方法是按重量比例稱取各成分，純凈水1000份，加熱，煮沸， 然后文火繼續煮沸3分鐘，停火，冷卻到室溫，棄藥渣，取藥液；再取一大小合適的橡膠塞， 塞子上打2個直徑5毫米的孔，插入2根直徑5毫米的“L”形的玻璃管，其中一根垂直部分 長60厘米，穿過橡膠塞，底部離瓶底1厘米，水平部分長20厘米，通過料管與空壓機相連， 用以充氣，另一根玻璃管垂直部分長15厘米，底部穿過橡膠塞即可，水平部分長12厘米， 用以排氣；三角燒瓶通過瓶口裝入步驟1所述的培養液2500毫升，用步驟1培養的藻液作為 藻種進行接種，接種密度3.5萬個細胞/毫升，連接好橡膠塞和玻璃管及空壓機，將此培養裝 置放進微藻培養室中進行培養，培養室空調控溫，日光燈管提供照明，以打開燈管的數量多 少來調節光照強度；開始充氣，進行培養，充氣量為2升/分鐘，充氣量不宜太大，以藻細胞 浮起不下沉即可，充氣量太大會打碎藻細胞；共培養10天，前5天，設置光照強度4000lux， 溫度24℃，光周期設為L25min+D25min，即25分鐘光照，25分鐘黑暗，然后再25分鐘光照， 25分鐘黑暗，循環往復；后5天，設置光照強度7000lux，溫度(26℃)，光周期設為 L45min+D45min，即45分鐘光照，45分鐘黑暗，然后再45分鐘光照，45分鐘黑暗，循環往 復；到第7天，添加步驟1所述的洛氏角毛藻培養液250毫升，以補充因細胞生長、繁殖消 耗掉的營養鹽，到第8天，添加蒸餾水300毫升，以補充揮發掉的水分并稀釋藻液；到第10 天末，細胞密度達180±20萬個細胞/毫升，停止充氣和照明，拔掉橡膠塞，將藻液從瓶口倒 出，培養結束。