[發明專利]以菊芋為原料的產油微生物生產微生物油脂的方法

在審

• 申請號: 201610126982.8
• 申請日: 2016-03-07
• 公開（公告）號: CN105586371A
• 公開（公告）日: 2016-05-18
• 發明（設計）人: 林心萍;謝同舟;高寧;孫黎明;紀超凡;劉灑灑;朱容仟
• 申請（專利權）人: 大連工業大學
• 主分類號: C12P7/64
• 分類號: C12P7/64;C12N1/20;C12N1/14;C12N1/12
• 代理公司: 大連格智知識產權代理有限公司 21238
• 代理人: 劉琦

1.一種以菊芋為原料的產油微生物生產微生物油脂的方法，其特征在于， 包括如下步驟：

S1、制備菊芋水解液：將菊粉與水按質量比1:1～10混合，采用3mol/L鹽酸 調節pH至1～4；飽和蒸汽下水解10～40min，調節pH至中性，得到菊芋水解液；

S2、制備種子培養基：取步驟S1制得的菊芋水解液的二分之一，添加氮源 至1～20g/L，添加磷酸二氫鉀至1.0g/L，添加MgSO₄·7H₂O至0.5g/L，滅菌，得 到微生物的種子培養基；

S3、菌體增殖培養：以10％(V/V)接種量接入產油微生物種子液 (OD_600nm＝1～10)于步驟S1制得的種子培養基中，在20～40℃、轉速為 40～800rpm條件下，通氣培養12～96h，離心分離，收集菌體，即為增殖后的產 油微生物菌體；

S4、制備產油培養基：將步驟S1制得的菊芋水解液剩余的二分之一進行脫 磷處理，得到碳元素與磷元素摩爾比率大于70的除磷產油培養基；

或將步驟S1制得的菊芋水解液剩余的二分之一進行脫硫處理，得到碳元素 與硫元素摩爾比率大于150的除硫產油培養基；

S5、菌體油脂積累培養：將步驟S3制得的增殖后的產油微生物菌體接種于 步驟S4制得的除磷產油培養基或除硫產油培養基中；在20～40℃、pH值為 3.0～8.0、轉速為40～800rpm條件下培養48～168h，收集菌體，即為含油的產油 微生物菌體，于105℃烘干至恒重，得到產油微生物干菌體；

S6、提取產油微生物油脂：提取步驟S5得到的產油微生物干菌體中的油 脂，得到產油微生物油脂。

2.根據權利要求1所述以菊芋為原料的產油微生物生產微生物油脂的方法， 其特征在于，步驟S1所述菊粉的粒度為50～200目。

3.根據權利要求1所述以菊芋為原料的產油微生物生產微生物油脂的方法， 其特征在于，步驟S2所述氮源為酵母提取物、蛋白胨、NH₄NO₃、(NH₄)₂SO₄中 的一種或幾種組合。

4.根據權利要求1所述以菊芋為原料的產油微生物生產微生物油脂的方法， 其特征在于，步驟S3所述產油微生物為所述產油微生物為經發酵培養后、微生 物胞內油脂含量大于其細胞干重20wt％的真核或原核微生物；包括產油細菌、 產油真菌、產油霉菌、產油微藻。

5.根據權利要求4所述以菊芋為原料的產油微生物生產微生物油脂的方法， 其特征在于，

所述產油細菌為Arthrobacter屬、Rhodococcus屬或Mycobacterium屬；

所述產油真菌為Rhodosporidium屬、Cryptococcuscur屬、Yarrowia屬、 Rhodotorula屬、Rhizopus屬、Lipomyces屬、Trichosporon屬、Mortierella屬、 Mucor屬或Cunninghamella屬；

所述產油霉菌為Mortierella屬、Cunninghamella屬、Mucor屬或Aspergillus 屬；

所述產油微藻為Crypthecodinium屬、Botryococcus屬、Chlorella屬、 Nannochloropsis屬、Haliphthoros屬或Schizochytrium屬。

6.根據權利要求1所述以菊芋為原料的產油微生物生產微生物油脂的方法， 其特征在于，

步驟S4所述脫磷處理采用化學沉淀法；

步驟S4所述脫硫處理采用化學沉淀法。

7.根據權利要求1所述以菊芋為原料的產油微生物生產微生物油脂的方法， 其特征在于，步驟S6采用酸熱-有機溶劑法提取步驟S5得到的產油微生物干菌 體中的油脂。

8.根據權利要求7所述以菊芋為原料的產油微生物生產微生物油脂的方法， 其特征在于，步驟S6具體操作為：

S61、向步驟S5得到的產油微生物干菌體中按每克所述產油微生物干菌體 10ml濃度為4mol/L鹽酸的比例加入鹽酸，78℃水浴處理1.5h；

S62、冷卻后加入2倍體積的體積比為1:1的氯仿/甲醇溶劑萃取，收集有機 相；

S63、將步驟S62剩余的水相以等體積氯仿再萃取一次，收集有機相；

S64、將步驟S62及步驟S63收集的有機相合并，加等體積0.1wt％的氯化 鈉溶液，混勻，離心，收集有機相；

S65、將步驟S64收集的有機相用無水硫酸鈉干燥，減壓蒸發除去溶劑，得 到產油微生物油脂。