[發明專利]一種基于復合半導體納米材料的簡易型電致化學發光免疫傳感器的制備方法及應用

在審

• 申請號: 201610126877.4
• 申請日: 2016-03-07
• 公開（公告）號: CN105759026A
• 公開（公告）日: 2016-07-13
• 發明（設計）人: 花小霞;周長利;夏方詮
• 申請（專利權）人: 濟南大學
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558;G01N33/574;G01N27/30
• 代理公司: 濟南譽豐專利代理事務所(普通合伙企業) 37240
• 代理人: 李茜

技術領域

本發明涉及電致化學發光免疫傳感器技術領域，特別是涉及一種以類石墨氮化碳和二硫化鉬納米復合物（g-C₃N₄/MoS₂）為發光材料和基底材料的簡易型免疫傳感器的制備方法及應用。將g-C₃N₄和MoS₂兩種帶隙相近的半導體納米材料復合可以有效提高傳感器的發光強度、并且增強穩定性。基于抗原抗體之間的特異性結合，該傳感器用于檢測甲胎蛋白，根據不同濃度的甲胎蛋白對電子傳遞阻礙程度不同，繼而使得傳感器電致化學發光強度不同，實現甲胎蛋白的檢測。

背景技術

甲胎蛋白(AFP)是一種重要的腫瘤標志物，當肝細胞發生癌變時，AFP在血清中的含量會急劇增加，而且血清中AFP升高，還可出現于畸胎瘤、睪丸和卵巢腫瘤等，因此檢測AFP的含量是診斷原發性肝癌的重要手段之一。所以急需發展一種簡便、快速、靈敏的檢測AFP的方法，實現肝癌的早期診斷。

目前測定AFP的方法有很多，如酶聯免疫分析法、高效液相色譜法、微生物法等。這些方法具有較高的靈敏度和選擇性，但檢測過程需要昂貴的專用儀器，需要復雜的前處理且操作繁瑣、樣品消耗量較大，不適宜快速檢測。電致化學發光免疫傳感器具有設備簡單，操作方便，靈敏度高，選擇性好，檢測速度快等優點。因此本發明制備了一種基于g-C₃N₄/MoS₂的簡易型電致化學發光免疫傳感器，將免疫學方法與電致化學發光技術相結合，通過抗原抗體之間的特異性結合實現對AFP的靈敏檢測。

本發明利用滴涂法將g-C₃N₄/MoS₂修飾到玻碳電極表面，g-C₃N₄和MoS₂都是良好的二維半導體材料，比表面積大、成膜能力強，可以作為基底材料固定大量抗體。同時，MoS₂和g-C₃N₄具有相近的帶隙結構，可以有效的避免g-C₃N₄的電子空穴對的復合，增強光電轉換效率，提高電致化學發光的強度和穩定性。本發明中構建的電致化學發光免疫傳感器具有制備過程簡單，成本低，穩定性好，靈敏度高等優點，為AFP檢測提供了一種可行的方法。

發明內容

本發明的目的是以g-C₃N₄/MoS₂為基底和發光材料，構建一種簡單快速，穩定性好，靈敏度高的電致化學發光免疫傳感器，并且將該電致化學發光免疫傳感器用于AFP的靈敏檢測。

本發明的技術方案為：

1.一種基于g-C₃N₄/MoS₂納米復合材料的簡易型電致化學發光免疫傳感器的制備方法：

(1)用1.0μm、0.3μm、0.05μm的Al₂O₃拋光粉依次打磨直徑為4mm的玻碳電極(GCE)，分別在乙醇和超純水中超聲清洗3min，氮氣吹干，取6~10μLg-C₃N₄/MoS₂納米復合材料分散液滴涂到電極表面，室溫下晾干成膜，用PBS(pH7.4)緩沖溶液沖洗以除去未鍵合的g-C₃N₄/MoS₂得到g-C₃N₄/MoS₂/GCE；

(2)取10μL8~10μg/mL的甲胎蛋白抗體(anti-AFP)標準溶液滴涂到電極表面，4℃下孵化過夜，用PBS(pH7.4)緩沖溶液沖洗得anti-AFP/g-C₃N₄/MoS₂/GCE；

(3)取10μL質量分數為1~3%的牛血清白蛋白(BSA)溶液滴涂到電極表面，在37℃下孵化1h，封閉非特異性結合的位點，用PBS(pH7.4)緩沖溶液沖洗電極表面得到BSA/anti-AFP/g-C₃N₄/MoS₂/GCE；