[發明專利]一種產多種脂肽類抗生物質的甲基營養型芽孢桿菌及其應用

在審

• 申請號: 201610126777.1
• 申請日: 2016-03-07
• 公開（公告）號: CN105713858A
• 公開（公告）日: 2016-06-29
• 發明（設計）人: 魏新燕;段普凡;賈振華;黃亞麗
• 申請（專利權）人: 河北省科學院生物研究所
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A01N63/02;A01P3/00;C12R1/10
• 代理公司: 石家莊新世紀專利商標事務所有限公司 13100
• 代理人: 楊欽祥;董金國

技術領域

本發明涉及微生物發酵及生物防治技術領域，具體涉及一種產多種脂肽類抗生物質的甲基營養型芽孢桿菌BH21及其應用。

背景技術

隨著化學農藥和傳統抗生素的大量使用，食品安全和環境問題越發突出，生物防治在農業生產中的應用逐漸受到重視。近年來，微生物來源的脂肽被用于抗真菌病方面的研究有了很大的進展，相對于化學農藥和傳統抗生物質而言，脂肽類具有對動植物無害、可生物降解以及不易使病原微生物產生，其中枯草芽孢桿菌（Bacillus.subtilis）、地衣芽孢桿菌（B.licheniformis）以及蠟狀芽孢桿菌（B.cereus）是產脂肽的主要菌種，產生的脂肽類抗生素主要有表面活性素(Surfactin)、伊枯草菌素(Iturin)和豐原素（Fengycin）三大類。

不同類型的脂肽類抗生物質往往具有不同的生物活性。Iturins和fengycins對真菌具有較強的拮抗能力；surfactins主要對細菌、病毒和支原體有抑制作用，對真菌沒有太大的抑制作用，但其能夠增強Iturins或fengycins對真菌的醫治效果，還能在植物根部形成一層生物膜保護植物根部免受病原菌的入侵。

不同的菌種產生的脂肽類物質不同，曹云（SQR9微生物有機肥防治黃瓜土傳枯萎病的效應與機制研究，南京農業大學，2011）發現SQR9菌株含有Bacillomycin和Fengcin兩種脂肽類抗生素，Ye等（Identificationofantifungalsubstance（IturinA2）producedbyBacillussubtilisB47anditseffectonSouthernCornLeafBlight，JournalofIntegrativeAgriculture，2012，11（1）：90-99.）鑒定枯草芽孢桿菌B47發酵液的主要成分為Iturin。

目前關于甲基營養型芽孢桿菌產脂肽類物質的研究較少，中國專利ZL201310466625.2公開了一種產脂肽類抗生物質的甲基營養型芽孢桿菌B.methylotrophicus9912，其產生的脂肽化合物為6-AbuC16fengycin、anteiso-C15surfactin和anteiso-C15surfactinmethylester，即僅包含Surfactin和Fengcin兩種類型的脂肽，對黃瓜灰霉病及蘋果腐爛病等有防治效果。

發明內容

基于以上技術現狀，本發明的目的是提供一株新的甲基營養型芽孢桿菌BH-21，并提供其應用，該菌株能產生多種脂肽類物質，對番茄灰霉病具有顯著的防治效果。

本發明采用的技術方案如下：

一種產多種脂肽類抗生物質的甲基營養型芽孢桿菌BacillusmethylotrophicusBH21，該甲基營養型芽孢桿菌于2015年12月09日在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心進行了保藏，保藏號為CGMCCNo.11840，保藏單位地址：北京市朝陽區北辰西路1號院3號，中國科學院微生物研究所，郵編100101。

該甲基營養型芽孢桿菌BH21的16sRNA序列在Genebank的登錄號為KT889363，其gyrB基因序列在Genebank的登錄號為KT889364。

該甲基營養型芽孢桿菌BH21含有產生脂肽類抗生物質的基因，包括ituA、ituB、ituC、ituD，fenD，srfAB和yndJ基因。

該甲基營養型芽孢桿菌BH21產生Iturin類、Fengycin類、Sufactin類和Yndj類脂肽類抗生物質。

本發明還提供了所述的甲基營養型芽孢桿菌BH21在防治番茄灰霉病中的應用。

具體地，將所述甲基營養型芽孢桿菌BH21的發酵液用于生物防治，所述發酵液由以下步驟制得：按體積比3%的接種量將培養好的種子液接種到大量發酵培養基中，180r/min，32℃培養72h，得到發酵液，即可用于生物防治。

所述種子液通過下述方法獲得：將保存的甲基營養型芽孢桿菌BH21劃線轉接到ZoBell's2216E培養基平板中，置于培養箱28℃恒溫培養2天；將獲得的甲基營養型芽孢桿菌BH21的菌苔接種到PB液體培養基中，28℃搖床振蕩培養18h得到種子液。