[發明專利]一種消除種傳禾草內生真菌的方法

在審

• 申請號: 201610126593.5
• 申請日: 2016-03-07
• 公開（公告）號: CN105706571A
• 公開（公告）日: 2016-06-29
• 發明（設計）人: 李秀璋;李春杰;柴青;魏學凱
• 申請（專利權）人: 蘭州大學
• 主分類號: A01C1/00
• 分類號: A01C1/00
• 代理公司: 北京中恒高博知識產權代理有限公司 11249
• 代理人: 呂玉博

技術領域

本發明涉及一種消除種傳禾草內生真菌的方法。

背景技術

Epichlo?屬內生真菌可與大部分冷季型禾草形成互惠共生的禾草-內生真菌共生體。由于內生真菌侵染形成的這種共生體通常可產生對家畜有毒的生物堿類次生代謝產物，給各個國家草地畜牧業的生產帶來不可估量的損失。自然界中，部分禾草內生真菌侵染率高達100%，因此研究人員為了確定這類內生真菌對宿主禾草的生長和生態效應，常常需要消除其在宿主體內的存在，建立不帶內生真菌的試驗材料進行比較研究。目前一些滅菌方法常操作費時費力且價格昂貴，部分儀器無法普及，因此建立一種高效快捷的滅菌方法勢在必行。同時，這種內生真菌主要靠宿主種子進行垂直傳播，因而從傳播源頭入手滅除內生真菌，可以較為有效的控制其的傳播和活力。

目前消除種傳禾草內生真菌的方法有以下幾種：（1）熱水浴滅菌：利用沸水浴加熱除去種子內部攜帶的種傳真菌。缺點是：除菌效率不高，且沸水浴極易造成種子活力下降。（2）高溫干熱滅菌：將種子放置于烘箱中，利用長時間的干熱處理對種子進行滅菌。缺點是：花費時間較長，耗能較高，且滅菌效果一般。（3）殺菌劑處理種子：將帶菌種子置于一定濃度的殺菌劑溶液中長時間浸泡滅菌。缺點是：相對于其他方法價格昂貴，不利于大量種子的滅菌處理。因此，需要找到一種優異的消除種傳禾草內生真菌的方法。

發明內容

為了解決現有技術中存在的問題，本發明提供了一種消除種傳禾草內生真菌的方法，除菌效率達95%，且不會損傷種子活力，花費時間短，耗能低，價格低廉，適于大量種子的滅菌處理。

本發明提供一種消除種傳禾草內生真菌的方法，步驟如下：

（1）將蒸餾水加熱至50±2℃保溫，將禾草種子加入蒸餾水；

（2）在超聲波儀中加入50±2℃蒸餾水，迅速將已加入種子的容器放入超聲波儀中進行超聲處理；

（3）對帶菌種子進行20-25分鐘的超聲處理，超聲處理過程中，容器及超聲波儀中蒸餾水的溫度維持在50±2℃。

水浴加熱能夠滅除種傳真菌，但是水浴時的溫度或時間發生變化，均會影響禾草種傳內生真菌的滅除效果，也極易降低種子活力；超聲波滅菌的方法在植物種傳真菌方面尚未應用。本發明采用低溫水浴與超聲波結合的方法處理帶菌種子，并嚴格控制超聲處理時間，在達到滅菌的前提下最大程度的降低超聲波對種子活力造成的負面影響，將禾草內生真菌帶菌率從100%降低至5%以內，達到了良好的滅菌效果。

作為優選，所述禾草內生真菌為專性寄生在禾本科草內的Epichlo?屬內生真菌。

作為優選，步驟（1）中蒸餾水的溫度為50℃。

作為優選，步驟（2）中蒸餾水的溫度為50℃。

作為優選，步驟（3）中，根據禾草種子千粒重的不同，對帶菌種子進行20-25分鐘的超聲處理，千粒重輕，超聲處理時間短，千粒重重，超聲處理時間長。

作為進一步優選，當千粒重小于等于1.13g時，超聲處理時間為20分鐘；千粒重每增加0.15g，超聲處理時間相應增加20s，最長超聲處理時間不得超過25分鐘。

作為優選，步驟（3）中，超聲頻率為40kHz。

作為進一步優選，步驟（3）后，用無菌水沖洗禾草種子，晾干。

作為優選，所述晾干為在通風處自然晾干。

本發明的方法具有以下效果：

1、效果好：內生真菌滅除效果好，處理后，禾草內生真菌帶菌率降低至5%以內；

2、簡便：不用復雜的儀器及處理條件即可以對種傳禾草真菌進行滅除；

3、高效：加上準備時間，種子的滅菌工作在一個小時內就能夠完成；

4、費用較低：本方法涉及材料僅為超聲波儀，蒸餾水，容器等一些較為簡單的儀器和設備，耗能較低；

5、對種子活力損傷較小：由于處理的溫度較低且時間較短，不易造成種子膜脂損傷，且一定程度的超聲波處理提高了種子的活力。

具體實施方式

以下的實施例便于更好地理解本發明，但并不限定本發明。下述實施例中的實驗方法，如無特殊說明，均為常規方法。下述實施例中所用的試驗材料，如無特殊說明，均為市售。

所用儀器：超聲波儀(型號：SB-5200D；頻率：40kHz；功率：300W)。

本發明的消除種傳禾草內生真菌的方法為：

（1）將蒸餾水加熱至50±2℃保溫備用；

（2）將帶菌的禾草種子置于容器中，加入50±2℃蒸餾水沒過種子，備用；