[發(fā)明專(zhuān)利]用于膀胱癌非侵入式診斷的分子標(biāo)志

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610126380.2
• 申請(qǐng)日: 2016-03-04
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN105759052B
• 公開(kāi)（公告）日: 2017-08-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳煒;羅俊航;謝丹;周邦?yuàn)^
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 陳煒;羅俊航
• 主分類(lèi)號(hào): G01N33/68
• 分類(lèi)號(hào): G01N33/68;G01N33/574
• 代理公司: 廣州嘉權(quán)專(zhuān)利商標(biāo)事務(wù)所有限公司44205
• 代理人: 胡輝,許飛

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及用于腫瘤診斷的分子標(biāo)志，特別涉及用于膀胱癌非侵入式診斷的分子標(biāo)志。

背景技術(shù)

在全球范圍內(nèi)，每年有近90萬(wàn)人被診斷為膀胱癌，每年約有25萬(wàn)人死于膀胱癌[1]。

在我國(guó)，膀胱癌是泌尿系統(tǒng)最常見(jiàn)的惡性腫瘤，膀胱癌可分為非肌層浸潤(rùn)性膀胱癌(T_a/T₁期)和肌層浸潤(rùn)性膀胱癌(T₂-T₄期)。早期膀胱癌患者可行經(jīng)尿道膀胱腫物電切術(shù)(Transurethral Resection of Bladder Tumor TURBT),而肌層浸潤(rùn)性膀胱癌患者需行全膀胱切除、尿流改道，手術(shù)后嚴(yán)重影響患者生活質(zhì)量，而且手術(shù)之后5年生存率僅為23％-46％[2]。因此，膀胱癌的早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療是提高腫瘤治療效果和提高患者生存質(zhì)量的關(guān)鍵。膀胱鏡檢查是膀胱癌早發(fā)現(xiàn)、早診斷的“金標(biāo)準(zhǔn)”，但膀胱鏡檢查為有創(chuàng)性檢查，并且可能導(dǎo)致泌尿系感染、出血、尿道損傷，并且臨床應(yīng)用受到外科醫(yī)生經(jīng)驗(yàn)水平及場(chǎng)地設(shè)備等制約，再者，膀胱光鏡檢查的費(fèi)用也頗為昂貴，諸多因素造成了膀胱鏡檢查不利于膀胱癌的早期篩查。因此，尋求無(wú)創(chuàng)、便捷、準(zhǔn)確的膀胱癌早期診斷和術(shù)后檢測(cè)方法，是研究者不斷努力的方向。

通過(guò)檢測(cè)尿液中的瘤標(biāo)是目前早期膀胱癌無(wú)創(chuàng)性診斷的一種研究趨勢(shì)。目前已經(jīng)有數(shù)種獲得美國(guó)食品藥物管理局(Food and Drug Administration,FDA)批準(zhǔn)能在臨床上應(yīng)用的尿液膀胱腫瘤標(biāo)記物，包括核基質(zhì)蛋白22(nuclear matrix protein 22，NMP22)、膀胱腫瘤抗原(Bladder tumor antigen,BTA)、UroVysion、ImmunoCyt^TM CYFRA21-1、UBC test[3,4]。其中NMP22及BTA檢測(cè)的平均敏感度分別為67％(41％-100％)及68％(51％-100％)、平均特異度分別為79％(43％-95％)及75％(54％-93％)，而其他幾種瘤標(biāo)的敏感度和特異度有待多地區(qū)和多中心的進(jìn)一步研究。這些檢測(cè)方法的臨床應(yīng)用，可以使得膀胱癌患者減少膀胱鏡檢查得頻率，減少患者的痛苦及醫(yī)療費(fèi)用，但仍然不能完全取代膀胱鏡檢查。因此，在尿液當(dāng)中尋找新的檢測(cè)瘤標(biāo)是目前膀胱癌無(wú)創(chuàng)性診斷的研究熱點(diǎn)方向之一，期望能發(fā)現(xiàn)診斷準(zhǔn)確率更高的瘤標(biāo)，或者通過(guò)新瘤標(biāo)與某種常用瘤標(biāo)的聯(lián)合診斷來(lái)提高診斷準(zhǔn)確度，從而逐步實(shí)現(xiàn)膀胱癌無(wú)創(chuàng)診斷的目標(biāo)。

AIB1(Amplified in breast cancer 1)首先在人類(lèi)乳腺癌細(xì)胞株當(dāng)中被發(fā)現(xiàn)的癌基因，并已經(jīng)證實(shí)了其在前列腺癌、乳腺癌等惡性腫瘤細(xì)胞當(dāng)中擴(kuò)增與表達(dá)，AIB1是多種惡性腫瘤生長(zhǎng)、增殖多必須的[5-7]。發(fā)明人的前期研究表明，AIB1在膀胱癌組織當(dāng)中的基因及蛋白表達(dá)水平均較正常組織增高，AIB1高表達(dá)水平與患者生存時(shí)間呈負(fù)相關(guān)，同時(shí)發(fā)明人還闡明了AIB1通過(guò)AKT信號(hào)通路及充當(dāng)E2F1協(xié)調(diào)激活因子的作用來(lái)促進(jìn)膀胱腫瘤細(xì)胞的增殖，發(fā)明人通過(guò)利用納米技術(shù)特異抑制ABI1的表達(dá)之后，能后明顯抑制膀胱癌細(xì)胞株的體外生長(zhǎng)與及其在免疫缺陷小鼠體內(nèi)成瘤[8-10]。

EIF5A2(Eukaryotic initiation factor 5A2)基因首先在卵巢癌HT29細(xì)胞株中發(fā)現(xiàn)[11]。之后研究者相繼在卵巢癌、胃癌、肝癌、肺癌及結(jié)腸癌等惡性腫瘤中發(fā)現(xiàn)EIF5A2基因的擴(kuò)增及其編碼的蛋白異常表達(dá)，并且與腫瘤的發(fā)生及復(fù)發(fā)密切相關(guān)[12-17]。發(fā)明人的前期研究表明，EIF5A2基因在膀胱癌組織當(dāng)中擴(kuò)增，其編碼的蛋白異常表達(dá)，EIF5A2可以充當(dāng)腫瘤復(fù)發(fā)及進(jìn)展的預(yù)測(cè)因子。發(fā)明人發(fā)現(xiàn)EIF5A2是患者預(yù)后的獨(dú)立預(yù)測(cè)因子。發(fā)明人之后的研究當(dāng)中揭示了EIF5A2是通過(guò)STAT而促進(jìn)TGF-B1表達(dá)，進(jìn)而誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化化來(lái)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲[18-20]。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種更為準(zhǔn)確的用于膀胱癌診斷的非侵入式分子標(biāo)志，以及基于該分子標(biāo)志的診斷試劑盒。

基于前期的研究基礎(chǔ)，發(fā)明人通過(guò)檢測(cè)膀胱患者及非膀胱癌人群中尿液當(dāng)中的AIB1及EIF5A2的蛋白表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)AIB1及EIF5A2能夠充當(dāng)膀胱癌無(wú)創(chuàng)性診斷的新瘤標(biāo)，聯(lián)合AIB1、EIF5A2及NMP22更能提高膀胱癌的診斷準(zhǔn)確度。