[發明專利]IL-15修飾的腫瘤干細胞疫苗及其制備方法和用途

在審

• 申請號: 201610124433.7
• 申請日: 2016-03-04
• 公開（公告）號: CN105770879A
• 公開（公告）日: 2016-07-20
• 發明（設計）人: 周良學;郭剛;仝愛平;羅林麗;魏于全
• 申請（專利權）人: 四川大學
• 主分類號: A61K39/00
• 分類號: A61K39/00;A61P35/00
• 代理公司: 成都虹橋專利事務所(普通合伙) 51124
• 代理人: 梁鑫

技術領域

本發明屬于細胞免疫治療技術領域，具體涉及一種白介素15修飾的腫瘤干細胞疫苗及其 制備方法。

背景技術

惡性腫瘤的發病率日益升高，而傳統的治療方式難以有效地清除腫瘤細胞，特別是腫瘤 干細胞，因此其治愈率很低，復發率和死亡率較高，嚴重威脅人類的健康。惡性腫瘤具有多 種免疫逃逸機制，腫瘤細胞抗原免疫原性弱以及缺乏一些免疫輔助因子的表達等，導致現有 的腫瘤治療臨床治療效果欠佳[GrivennikovSI,GretenFR,KarinM.Immunity,inflammation, andcancer.Cell,2010,140:883–899.]。

在腫瘤治療中，腫瘤細胞疫苗治療已成為一種比較有效的治療方法。腫瘤的免疫細胞治 療是通過恢復、增強或激發腫瘤患者自身的免疫監測、抑制腫瘤細胞增殖或殺滅腫瘤細胞， 達到有效地清除腫瘤細胞以治療腫瘤、預防復發與轉移和最終根治腫瘤的目的。腫瘤細胞疫 苗的制備方式是滅活自體或異體的腫瘤細胞至其增值受到抑制，但保留其免疫原性。理論上 可以殺滅所有腫瘤細胞，且具主動性好、有特異性強、副作用輕等優點,正在逐步成為繼手 術、放療和化療后的第四種腫瘤治療模式。目前，基于腫瘤細胞免疫治療的基礎研究和臨床 應用已成為研究熱點與發展方向[OgiC,ArugaA.Immunologicalmonitoringofanticancer vaccinesinclinicaltrials.Oncoimmunology,2013,2:e26012.]。

白細胞介素15(interleukin15,IL-15)是1994年Grabstein發現的，隨著研究的深入，我 們認識到IL-15一個重要的參與免疫調節及誘導抗腫瘤免疫反應的細胞因子。該細胞因子可 以促進T細胞的增殖，同時促進T細胞產生IFN-γ和TNF-α等抗腫瘤因子，增強其抗腫瘤的 活性。此外還具有調節B細胞、NK細胞的功能，誘導免疫球蛋白的分泌，對細胞疫苗亦有 較好的免疫增強作用等。研究還表明，IL-15在免疫佐劑等方面表現出巨大的應用前景。[Mishra A,SullivanL,CaligiuriMA.Molecularpathways:interleukin-15signalinginhealthandincancer. ClinCancerRes,2014,20:2044–2050.]

腫瘤干細胞是腫瘤中具有自我更新能力并能產生異質性腫瘤細胞的細胞。從本質上講， 腫瘤干細胞通過自我更新和無限增值維持著腫瘤細胞群的生命力，其運動和遷徙能力又使腫 瘤細胞的轉移成為可能。另外，腫瘤干細胞可以長時間處于休眠狀態并具有多種耐藥分子而 對殺傷腫瘤細胞的外界理化因素不敏感，因此腫瘤往往在常規腫瘤治療方法消滅大部分普通 腫瘤細胞后一段時間復發。因此，研究能刺激宿主打破對腫瘤細胞甚至是腫瘤干細胞多重免 疫麻痹的治療手段是本領域目前要解決的重要問題。

發明內容：

本發明要解決的技術問題是為刺激宿主打破對腫瘤細胞甚至是腫瘤干細胞多重免疫麻痹 從而治療腫瘤提供一種新的有效手段。

本發明解決技術問題的技術方案是提供一種腫瘤干細胞疫苗。該腫瘤干細胞疫苗以經過 滅活處理至失去分化、增生能力，但仍能表達IL-15的含有IL-15表達載體的腫瘤干細胞作 為主要活性成分。

其中，上述的腫瘤細胞疫苗中所述的腫瘤干細胞為膠質瘤干細胞、前列腺癌干細胞、肺 癌干細胞、腸癌干細胞、肝癌干細胞、乳腺癌干細胞、胃癌干細胞、腎癌干細胞、鼻咽癌干 細胞、皮膚癌干細胞、食道癌干細胞、黑色素瘤干細胞中至少一種。

其中，上述的腫瘤細胞疫苗中所述的滅活處理為輻照細胞滅活法、微波細胞滅活法、電 磁波細胞滅活法、激光細胞滅活法、高溫細胞滅活法，超聲破碎細胞滅活法，反復細胞凍融 滅活法，酶學消化細胞滅活法中的至少一種。只要能夠不破壞腫瘤干細胞，使其至失去分化、 增生能力，但仍能表達IL-15即可。

進一步的，上述的IL-15表達載體為可表達IL-15的重組質粒載體或者病毒載體。

其中，上述的的可表達IL-15的重組質粒載體包括以下的至少一種：

1)、根據編碼IL-15的基因構建的重組質粒載體；或

2)、根據編碼IL-15的基因序列中經過取代、缺失或添加一個或幾個核苷酸且具有IL-15 基因功能的基因構建的重組質粒載體；或