[發(fā)明專利]一種農(nóng)藥對蜜蜂的風(fēng)險(xiǎn)評價(jià)方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610123832.1
• 申請日: 2016-03-04
• 公開（公告）號(hào): CN105784932A
• 公開（公告）日: 2016-07-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 吳遲;何明遠(yuǎn);薛白;王長賓;朱志峰;才冰
• 申請（專利權(quán)）人: 北京依科世福科技有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/00
• 分類號(hào): G01N33/00
• 代理公司: 北京和信華成知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11390
• 代理人: 劉娜

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及農(nóng)藥風(fēng)險(xiǎn)評價(jià)方法，具體涉及一種農(nóng)藥對蜜蜂的風(fēng)險(xiǎn) 評價(jià)方法。

背景技術(shù)

蜜蜂是農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中主要的授粉物種。蜜蜂授粉可減少農(nóng)藥化肥的 施用，適宜生態(tài)農(nóng)業(yè)和綠色農(nóng)業(yè)的發(fā)展；對維護(hù)農(nóng)業(yè)生物多樣性、穩(wěn) 定性具有重要生態(tài)功能。有研究顯示：全球約87.5％的開花植物依靠 昆蟲授粉，其中87種為主要糧食作物，占世界糧食總產(chǎn)量的35％，而 蜜蜂約占授粉昆蟲總數(shù)的80％，無論是人工飼養(yǎng)還是野生存在，都在 作物授粉方面發(fā)揮著巨大作用。同時(shí)蜜蜂授粉所產(chǎn)生的經(jīng)濟(jì)效益也相 當(dāng)可觀，每年僅我國由蜜蜂傳花授粉帶來的經(jīng)濟(jì)效益就高達(dá)150億元。 因此，蜜蜂具有重大的生態(tài)和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。但蜜蜂對農(nóng)藥敏感程度極高， 濫用或誤用農(nóng)藥都將破壞蜜蜂棲息地及其食物來源，從而對蜜蜂產(chǎn)生 嚴(yán)重威脅。1990年至今，因農(nóng)藥中毒導(dǎo)致蜜蜂死亡、蜂群數(shù)量驟減的 現(xiàn)象遍及北美、歐洲、亞洲等許多國家，已成為全球普遍關(guān)注的環(huán)境 污染與生物安全問題。

為保護(hù)生態(tài)系統(tǒng)健康，從源頭控制高風(fēng)險(xiǎn)性農(nóng)藥對環(huán)境生物產(chǎn)生 的潛在不良影響，我國環(huán)保部、農(nóng)業(yè)部也逐漸將農(nóng)藥對蜜蜂生物毒性 與安全性評價(jià)列為農(nóng)藥登記管理、農(nóng)藥使用環(huán)境安全管理的重要內(nèi)容 之一，并制定了農(nóng)藥對蜜蜂急性毒性試驗(yàn)準(zhǔn)則。但迄今為止，我國作 為農(nóng)藥生產(chǎn)和使用第一大國，并未建立完整的農(nóng)藥對蜜蜂安全性風(fēng)險(xiǎn) 評價(jià)體系。總體來看：我國農(nóng)藥對蜜蜂生物安全性風(fēng)險(xiǎn)評價(jià)工作比較 落后，表現(xiàn)在實(shí)驗(yàn)方法上缺乏亞慢性、慢性試驗(yàn)方法，評價(jià)體系缺乏 立體多層次實(shí)驗(yàn)。

農(nóng)藥對蜜蜂的風(fēng)險(xiǎn)評價(jià)，是研究農(nóng)藥對蜜蜂種群影響的科學(xué)方 式。為了正確、合理、科學(xué)地評價(jià)，各國相繼制定了一系列的試驗(yàn)準(zhǔn) 則和評價(jià)方式。如在初級(jí)風(fēng)險(xiǎn)評估方面美國制定了農(nóng)藥對蜜蜂的急性 接觸毒性試驗(yàn)準(zhǔn)則，但尚無急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)準(zhǔn)則。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明公開了一種農(nóng)藥對蜜蜂慢性10d飼喂毒性試驗(yàn)的方法和 藥劑NOEC值的測定方法，完善了農(nóng)藥對蜜蜂安全性評估工作方法。

本發(fā)明的實(shí)驗(yàn)方案為：

一種農(nóng)藥對蜜蜂的風(fēng)險(xiǎn)評價(jià)方法，方法步驟如下：

(1)試驗(yàn)用蜂為1～3日齡的幼蜂；

(2)進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)：以供低于試藥劑LC₅₀值設(shè)置4～8種濃度梯度配 置成含藥糖水對幼蜂進(jìn)行連續(xù)10天飼喂，每個(gè)濃度3次重復(fù)，每 個(gè)重復(fù)10只幼蜂；

(3)正試驗(yàn)：根據(jù)預(yù)試驗(yàn)結(jié)果范圍，將供試藥劑先用溶劑溶解 后，再用50％蔗糖水溶液稀釋并配制成含藥糖水連續(xù)10天對幼蜂 進(jìn)行飼喂；設(shè)空白對照組、溶劑對照組各15次重復(fù)，處理組10 次重復(fù)，每個(gè)重復(fù)10只幼蜂；試驗(yàn)期間每隔24±1h更換含藥糖水， 每天飼喂前后用分析天平對飼喂管進(jìn)行稱重，以獲得每24h糖水 消耗量；

(4)試驗(yàn)開始后連續(xù)觀察幼蜂的死亡數(shù)、亞致死作用、異常行 為；記錄各處理組每天的食物攝取量及整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間的累積攝取 量；

(5)藥劑對幼蜂NOEC值的測定：不可見效應(yīng)濃度(NOEC)值用 通過方差分析得出：若與空白試驗(yàn)組沒有顯著性差異的最高濃 度，即為NOEC值；或通過濃度-效應(yīng)關(guān)系得出：與空白實(shí)驗(yàn)組 相比，根據(jù)實(shí)驗(yàn)測試所得的濃度-效應(yīng)關(guān)系，其影響程度低于空 白的10％的濃度，即視為NOEC值；LOEC值的測定：最低可見 效應(yīng)濃度(LOEC)，通過供試物對幼蜂的毒性效應(yīng)和空白對照 組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性差異(p＜0.05)的最低濃度，及供試物 對供試蜜蜂有不利影響的最低濃度。

優(yōu)選的，步驟(2)如下：進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)：以供試藥劑LC₅₀值的 1/10～1/800設(shè)置4～8種濃度梯度配置成含藥糖水對幼蜂進(jìn)行連續(xù)10天 飼喂，每個(gè)濃度3次重復(fù)，每個(gè)重復(fù)10只幼蜂；

優(yōu)選的，步驟(3)中，處理組以供試藥劑LC₅₀值的1/10、1/50、 1/100、1/200、1/400、1/800的比例設(shè)置4～8種濃度梯度配置成含藥糖 水對幼蜂進(jìn)行飼喂。

優(yōu)選的，步驟(1)中1～3日齡的幼蜂的收集方法為：待蜂王在新 脾上產(chǎn)卵之日算起，間隔19日左右將封蓋子脾放入小暗盒中，然后將 小暗盒打小孔后放入溫度控制在33±2℃，相對濕度60～80％，黑暗條 件下的人工氣候箱，待新蜂出房，用毛刷將其刷入幼蜂飼喂盒中，用 花粉和花蜜混勻后喂食1～3天，收集幼蜂。