[發明專利]一種用尿液為主要氮源二級培養紫球藻的方法

在審

• 申請號: 201610123810.5
• 申請日: 2016-03-07
• 公開（公告）號: CN105524838A
• 公開（公告）日: 2016-04-27
• 發明（設計）人: 王培磊;徐樹建;劉金民;劉笑天;李愛水
• 申請（專利權）人: 臨沂大學
• 主分類號: C12N1/12
• 分類號: C12N1/12;C12R1/89
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種用于用尿液為主要氮源二級培養紫球藻的培養液，其特征在于，紫球藻培養液由以下 重量份數的原料組成：人尿10-15份，馬尿5-9份，牛尿4-7份，過磷酸鈣0.02-0.05份， 氯化銨0.1-0.3份，磷酸銨0.02-0.05份，檸檬酸鐵銨0.02-0.05份，酒石酸鉀鈉0.06-0.09 份，琥珀酸鈉0.5-0.9份，D-葡萄糖0.1-0.3份，蔗糖0.2-0.3份，麥飯石粉0.05-0.08份， 草酸胺0.07-0.09份，硫酸亞鐵銨0.02-0.04份，硅酸鈉0.05-0.08份，鉬酸鈉0.0006-0.008 份，氯化鋅0.07-0.09份，氯化錳0.002-0.004份，氯化鈷0.005-0.009份，尼古丁酸0.05-0.08 份，對氨安息香酸0.02-0.04份，肌醇0.005-0.007份，葉酸0.0004-0.0008份，維生素B₁0.0003-0.0007份，維生素B₁₂0.0005-0.0008份，硫胺素0.001-0.003份，吲哚乙酸 0.0004-0.0008份，磁化海水1000份。

2.根據權利要求1所述的一種用于用尿液為主要氮源二級培養紫球藻的培養液培養紫球藻的 方法，其特征在于，

紫球藻的第一級培養方法取一500毫升的蒸餾瓶，洗刷干凈，裝入步驟1所述紫球藻培養 液250毫升，輕輕搖勻，取處于指數生長期、干凈、無污染、生長旺盛的紫球藻藻種接種， 接種密度5萬個細胞/毫升，輕輕搖勻，用兩層干凈報紙和橡皮筋封口；再把此蒸餾瓶放進一 圓柱形燒杯中，以避免蒸餾瓶倒伏；把蒸餾瓶連同圓柱形燒杯一起放進光照培養箱中培養， 共培養9天，前5天，培養箱設置光照強度3800-4200lux，溫度25±1℃，光暗周期設為 L12+D12，即12小時光照，12小時黑暗，循環往復；后4天，設置光照強度5000-6000lux， 溫度27±1℃，光暗周期設為L18+D6，即18小時光照，6小時黑暗，循環往復；到第6天， 添加步驟1所述的新鮮培養液25毫升，以補充因生長繁殖消耗掉的營養鹽，到第7天，添加 蒸餾水20毫升，補充揮發掉的水分并稀釋藻液；整個培養期間，每天手動搖瓶6次，即每隔 4小時搖動一次，每次45秒鐘；到第9天末，藻細胞密度可達250±30萬個細胞/毫升，停 止培養，揭開報紙，將藻液從瓶口倒出，此藻液作為下一級培養的藻種；

紫球藻的第二級培養方法取一25升的白塑料桶，洗刷干凈，裝入權利要求1所述的培養液 12升，輕輕搖勻，用第一級培養的藻液作為藻種進行接種，接種密度4萬個細胞/毫升，桶 口插入一根長40厘米，直徑4毫米的玻璃管進行充氣，玻璃管插入藻液，玻璃管下端離桶底 部1厘米，玻璃管上端通過料管與空壓機相連，充氣量3-3.5升/分鐘，充氣量不宜太大，以 免打碎藻細胞；桶口敞開著，讓從藻液中溢出的氣體自由擴散掉；將此培養裝置放進微藻培 養室中進行培養，培養室空調控溫，日光燈管提供照明，以打開燈管的數量多少來調節光照 強度；共培養15天，前6天，設置光照強度4000-4500lux，溫度24±1℃，光周期設為L16+D8， 即16小時光照，8小時黑暗，循環往復；后9天，設置光照強度5500-6500lux，溫度26±1 ℃，一天24小時全部設為光照，沒有黑暗；到第7天，添加權利要求1所述的微藻培養液 450毫升，以補充因細胞生長、繁殖消耗掉的營養鹽，到第9天，添加蒸餾水400毫升，以 補充揮發掉的水分并稀釋藻液；到第12天，藻細胞密度可達210±30萬個細胞/毫升，從桶 口倒出藻液4升，然后加入4升步驟1所述的新鮮培養液，繼續充氣培養，到第13天，再倒 出藻液4升，然后加入4升步驟1所述的新鮮培養液，繼續充氣培養，到第14天，再倒出藻 液4升，然后加入4升步驟1所述的新鮮培養液，繼續充氣培養；到第15天末，停止充氣和 照明，將藻液全部從桶口倒出，培養結束。