[發明專利]一種D-丙氨酰-D-丙氨酸羧肽酶dacB基因及應用

在審

• 申請號: 201610123619.0
• 申請日: 2016-03-04
• 公開（公告）號: CN105671025A
• 公開（公告）日: 2016-06-15
• 發明（設計）人: 許菲;楊海泉;胡金遠;強書敏;沈微;陳獻忠;鄭虹寧;寧璐璐
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12N9/48
• 分類號: C12N9/48;C12N15/57;C12N15/70
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

發明涉及基因工程領域，具體地，本發明涉及一種D-丙氨酰-D-丙氨酸羧肽酶dacB及其基因和應用。

背景技術

肽聚糖是由雙糖單位，四肽尾還有肽橋聚合而成得多層網狀大分子結構。肽聚糖層的骨架由N-乙酰葡 萄糖胺和N-乙酰胞壁酸通過β-1,4糖苷鍵連接而成，糖鏈間由肽鏈交聯，構成穩定的網狀結構，這樣構成了 整個細菌表面的細胞壁。作為細胞壁的主要成分，肽聚糖的組成與細胞結構的完整性、外膜的通透性的維 持、細菌的抗干燥能力和耐熱性等均密切相關。dacB基因表達的D-丙氨酰-D-丙氨酸羧肽酶能夠從肽聚糖 五肽上移除最后一個末端D-Ala，導致轉肽反應中供體不可用，可以控制肽聚糖的網狀交聯水平，從而改 變細胞的通透性。

大腸桿菌(Escherichiacoli)表達系統是目前基因工程中最常用的蛋白表達系統，有操作簡單、成本 低廉等優點，可以快速大規模地生產目的蛋白。但是在E.coli的表達過程中，大部分蛋白在信號肽的引導 下分泌到周質空間，會導致中間體大量積聚，對蛋白質的生產造成阻礙。

發明內容

本發明的目的是提供一種可以提高E.coli胞外分泌水平的D-丙氨酰-D-丙氨酸羧肽酶、其氨基酸序列、 編碼該D-丙氨酰-D-丙氨酸羧肽酶的基因、含有該基因的重組質粒、含有該重組載體的重組菌株、該D-丙 氨酰-D-丙氨酸羧肽酶的應用。

具體包括：

本發明提供了一種D-丙氨酰-D-丙氨酸羧肽酶dacB，其氨基酸序列如序列1所示。

序列1：

MRFSRFIIGLTSCIAFSVQAANVDEYVTQLPAGANLALMVQKVGASAPAIDYHSQQMALPASTQKVI TALAALIQLGPDFRFTTTLETKGNVENGVLKGDLVARFGADPTLKRQDIRNMVATLKKSGVNQIDGNVLI DTSIFASHDKAPGWPWNDMTQCFSAPPAAAIVDRNCFSVSLYSAQKPGDMAFIRVASYYPVTMFSQVRTL PRGSAEAQYCELDVVPGDLNRFTLTGCLPQRSEPLPLAFAVQDGASYAGAILKDELKQAGITWSGTLLRQ TQVNEPGTVVASKQSAPLHDLLKIMLKKSDNMIADTVFRMIGHARFNVPGTWRAGSDAVRQILRQQAGV DIGNTIIADGSGLSRHNLIAPATMMQVLQYIAQHDNELNFISMLPLAGYDGSLQYRAGLHQAGVDGKVSA KTGSLQGVYNLAGFITTASGQRMAFVQYLSGYAVEPADQRNRRIPLVRFESRLYKDIYQNN

其中，該酶基因編碼477個氨基酸，其理論分子量為51.81kDa。

本發明提供了編碼上述D-丙氨酰-D-丙氨酸羧肽酶的基因dacB，具體的，該酶的基因序列如序列2所示。

序列2：