[發明專利]一種利用海螺消化腺酶解紫菜獲得體細胞的方法

在審

• 申請號: 201610122944.5
• 申請日: 2016-03-04
• 公開（公告）號: CN105670984A
• 公開（公告）日: 2016-06-15
• 發明（設計）人: 高麗華;高文;劉燕飛
• 申請（專利權）人: 福建省平潭縣水產良種實驗有限公司
• 主分類號: C12N5/04
• 分類號: C12N5/04;A01G33/02
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學俊

技術領域

本發明屬于海產品養殖技術領域，具體涉及一種利用海螺消化腺酶解紫菜獲得體細胞的方法。

背景技術

紫菜是海中互生藻類的統稱，其富含蛋白質、碘、磷、鈣等多種營養成分，還具有軟堅化痰、清熱利水、補腎養心等藥用功效，是一種集營養價值和保健功效于一體的天然的健康食品，也是目前世界上經濟價值最高的一種栽培海藻，其產值約占全世界人工栽培海藻總產值的三分之二。

每年從自然種群或栽培群體中選出具有優良性狀的紫菜成熟藻體作為種藻，再由種藻取得果孢子或者采用腐爛法、分塊法或酶解法獲得體細胞后培養成絲狀體，接種貝殼，大量培養貝殼絲狀體，是目前紫菜育種中最常用且傳統的方法。而酶解法反應條件溫和，能使體細胞受到的傷害降到最低程度，是目前最有效的一種獲得細胞的方法。但目前酶解法需使用裂解酶、纖維素酶等多種酶共同進行處理，且所使用的酶多為進口商品，價格昂貴。

發明內容

本發明的目的在于提供一種利用海螺消化腺酶解紫菜獲得體細胞的方法，其不僅可簡化操作，縮短酶解時間，且酶解效果好，酶解過程中無需加入纖維素酶等其他酶，可有效降低成本，具有較好經濟效益，適合產業化生產推廣。

為實現上述目的，本發明采用如下技術方案：

一種利用海螺消化腺酶解紫菜獲得體細胞的方法，其包括以下步驟：

1）取新鮮海螺的消化腺，用水漂洗2次后，放入勻漿機中進行勻漿，然后將其溶解在pH值為7.0、濃度為0.1mol/L的磷酸鹽緩沖液中；

2）在步驟1）所得溶液中加入硫酸銨，使溶液中硫酸銨的飽和度為30%進行鹽析，于4℃透析過夜，然后于1000r/min離心15min后，取上清液加硫酸銨至飽和度為90%進行二次鹽析，經透析、離心后取沉淀；

3）將步驟2）所得沉淀加水配制成濃度為0.2-0.3μg/mL的酶液；

4）將紫菜組織剪碎，按1-2mL/g的量加入酶液，于10℃、80r/min搖床上酶解處理2-3h，然后用100μm篩絹過濾去除未酶解的組織碎片，2500r/min離心5min，收集游離的體細胞。

所述海螺為粒花冠小月螺或朝鮮花冠小月螺。

海螺消化腺的提取方法為：將新鮮海螺在海水中清洗5-8次后，放在清水中饑餓2天，再用海水清洗3-5次后，將海螺敲碎，取出消化腺。

本發明的顯著優點在于：現有技術中往往將取出的消化器官經鹽析后干燥制成酶粉，再用其與纖維素酶、離析酶共同對藻類組織進行酶解，其酶解時間一般需6-9h，不僅操作周期長，烘干過程中若控制不當易使酶失活，且多種酶的使用還增加了生產成本。本發明直接將鹽析后的沉淀物作為酶液，可簡化操作，縮短2/3以上的酶解時間，且其酶解率可達95％以上，酶解效果好，酶解過程中無需加入纖維素酶等其他酶，可降低60%以上成本，而所得紫菜體細胞的活力可提高20%以上，且抗病及抗逆性強，具有較好經濟效益，適合產業化生產推廣。

具體實施方式

一種利用海螺消化腺酶解紫菜獲得體細胞的方法，其包括以下步驟：

1）取新鮮海螺的消化腺，用水漂洗2次后，放入勻漿機中進行勻漿，然后將其溶解在pH值為7.0、濃度為0.1mol/L的磷酸鹽緩沖液中；

2）在步驟1）所得溶液中加入硫酸銨，使溶液中硫酸銨的飽和度為30%進行鹽析，于4℃透析過夜，然后于1000r/min離心15min后，取上清液加硫酸銨至飽和度為90%進行二次鹽析，經透析、離心后取沉淀；

3）將步驟2）所得沉淀加水配制成濃度為0.2-0.3μg/mL的酶液；

4）將紫菜組織剪碎，按1-2mL/g的量加入酶液，于10℃、80r/min搖床上酶解處理2-3h，然后用100μm篩絹過濾去除未酶解的組織碎片，2500r/min離心5min，收集游離的體細胞。

所述海螺為粒花冠小月螺或朝鮮花冠小月螺。

海螺消化腺的提取方法為：將新鮮海螺在海水中清洗5-8次后，放在清水中饑餓2天，再用海水清洗3-5次后，將海螺敲碎，取出消化腺。

為了使本發明所述的內容更加便于理解，下面結合具體實施方式對本發明所述的技術方案做進一步的說明，但是本發明不僅限于此。

實施例1

1）將新鮮粒花冠小月螺在海水中清洗5次后，放在清水中饑餓2天，再用海水清洗3次后，將海螺敲碎，取出消化腺，用水漂洗2次；