[發(fā)明專(zhuān)利]一種預(yù)混合飼料中維生素A的測(cè)定方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610120438.2
• 申請(qǐng)日: 2016-03-03
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN105651909B
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-01-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉海瀅
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 蘇州帝凱維動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): G01N30/06
• 分類(lèi)號(hào): G01N30/06;G01N30/74
• 代理公司: 北京匯信合知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司11335
• 代理人: 吳甘棠

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及維生素A測(cè)定技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種復(fù)合預(yù)混合飼料中維生素A的測(cè)定方法。

背景技術(shù)

關(guān)于飼料中維生素A的測(cè)定，現(xiàn)在最常用的也是最為準(zhǔn)確的是GB/T17817-2010公開(kāi)的皂化提取法，其具體包括皂化、提取、濃縮和測(cè)定四個(gè)步驟。雖然上述方法可以準(zhǔn)確的測(cè)出飼料中所含維生素A的具體含量，但是上述方法包含上述四個(gè)步驟，且皂化和提取兩個(gè)步驟操作繁瑣，不適用于飼養(yǎng)企業(yè)或者飼料生產(chǎn)企業(yè)檢測(cè)室快速、及時(shí)檢測(cè)；為了能夠在飼養(yǎng)企業(yè)或者飼料生產(chǎn)企業(yè)檢測(cè)室快速、及時(shí)的檢測(cè)出維生素A，GB/T 17817-2010還公開(kāi)了一種比較簡(jiǎn)單的檢測(cè)方法，其被稱(chēng)為直接提取法，具體包括標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備、試樣溶液的制備以及使用高效液相色譜儀進(jìn)行檢測(cè)的步驟，其中，關(guān)于試樣溶液的制備步驟具體如下：稱(chēng)取試樣1g，精確至0.0001g，置于100mL的棕色容量瓶中，加入約80mL的甲醇，瓶塞不要擰緊，于65℃超聲波水浴中超聲提取30min，冷卻至室溫，用甲醇稀釋至刻度，充分搖勻即可。雖然，上述試樣溶液的制備步驟比較簡(jiǎn)單，非常適合飼養(yǎng)企業(yè)或者飼料生產(chǎn)企業(yè)快速及時(shí)檢測(cè)維生素A的目的，但是，由于維生素A是脂溶性的維生素，本身對(duì)熱度非常敏感，尤其是超聲溫度已經(jīng)超過(guò)了60℃，這樣在超聲提取的步驟中就會(huì)發(fā)生部分降解，使得最終檢測(cè)的維生素A的含量發(fā)生偏移，使得人們對(duì)飼料中關(guān)于維生素A的含量的判斷不正確，并且，在維生素A含量少時(shí)的相對(duì)偏差較大，在20％左右；同時(shí)，由于在超聲提取過(guò)程的使用的有機(jī)溶劑是甲醇，由于甲醇本身具有毒性且揮發(fā)性非常大，使得操作不方便且容易發(fā)生事故。

發(fā)明內(nèi)容

為此，本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題在于現(xiàn)有技術(shù)中，由于在超聲提取飼料中維生素A的過(guò)程溫度偏高，導(dǎo)致最終檢測(cè)飼料結(jié)果中維生素A含量偏低的問(wèn)題。

為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種復(fù)合預(yù)混合飼料中維生素A的測(cè)定方法，其包括：

(1)稱(chēng)取1-10g復(fù)合預(yù)混合飼料作為試樣，精確至0.0001g；

(2)將上述試樣置于棕色容量瓶中，加入約80mL維生素A混合溶劑，瓶塞不要塞緊，于10-35℃超聲波水浴中超聲提取10-20min，接著使用維生素A混合溶劑稀釋至刻度，充分搖勻得到維生素A溶解液；其中，所述維生素A混合溶劑為包括體積比為(98-99)：(0.8-1.5)：(0.2-0.5)的甲醇、正己烷和BHT形成的混合溶劑；其中，BHT為抗氧化劑，其化學(xué)名稱(chēng)為2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚，它以對(duì)甲酚、異丁醇為原料，以濃硫酸作為催化劑，氧化鋁為脫水劑，反應(yīng)生成2.6-二叔丁基對(duì)甲酚。

(3)使用高效液相色譜儀對(duì)上述維生素A溶解液進(jìn)行測(cè)定。

其中，步驟(2)中超聲波水浴的超聲波頻率為15-40KHZ。

進(jìn)一步，步驟(2)中超聲波水浴的超聲波頻率設(shè)置為梯度設(shè)置，所述梯度設(shè)置為超聲波頻率隨著超聲提取時(shí)間均勻增加。

在步驟(3)中，高效液相色譜儀的色譜條件如下：

色譜柱：C18型柱，長(zhǎng)150mm，內(nèi)徑4.6mm，粒度5μm；

流動(dòng)相：混合比例為體積比80-98：2-20的甲醇與水的混合液，其中甲醇與水都需要經(jīng)過(guò)0.45μm的過(guò)濾膜，按比例配好后超聲波超聲15min；

流速：1.0mL/min；

溫度：室溫；

進(jìn)樣量：20μl；

檢測(cè)波長(zhǎng)：326nm。

進(jìn)一步，所述測(cè)定方法還包括標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備，包括：

稱(chēng)取維生素A乙酸酯標(biāo)準(zhǔn)品(精確至0.0001g)于棕色容量瓶中，用所述維生素A混合溶劑溶解并稀釋至刻度，混勻，4℃保存。

優(yōu)選地，在步驟(2)中，關(guān)于維生素A混合溶劑的制備方法是通過(guò)將一定體積比的甲醇、正己烷和BHT通過(guò)超聲波超聲混合均勻。

本發(fā)明的上述技術(shù)方案相比現(xiàn)有技術(shù)具有以下優(yōu)點(diǎn)：