[發明專利]用于鑒定口蹄疫病毒和水泡性口炎病毒的引物組合及其應用

有效

• 申請號: 201610120331.8
• 申請日: 2016-03-03
• 公開（公告）號: CN105671201B
• 公開（公告）日: 2019-04-02
• 發明（設計）人: 謝芝勛;范晴;劉加波;龐耀珊;鄧顯文;謝志勤;謝麗基
• 申請（專利權）人: 廣西壯族自治區獸醫研究所
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;何葉喧

本發明公開了一種用于鑒定口蹄疫病毒和水泡性口炎病毒的引物組合及其應用。本發明的引物組合由引物組Ⅰ和引物組Ⅱ組成。引物組Ⅰ由引物FMDV?F3、FMDV?B3、FMDV–FIP和FMDV?BIP組成，依次如序列1至4所示。引物組Ⅱ由引物VSV?F3、VSV?B3、VSV?FIP和VSV?BIP組成，依次如序列5至8所示。本發明還保護所述引物組合在鑒別口蹄疫病毒和水泡性口炎病毒中的應用、鑒定待測病毒是否為口蹄疫病毒或水泡性口炎病毒中的應用、鑒定待測樣本是否感染了口蹄疫病毒和/或水泡性口炎病毒中的應用。本發明所建立的二重RT?LAMP方法是一種簡便，快速，低成本的診斷方法，可用于條件不好的基層和現場檢疫，也適用于大規模的流行病學調查。

技術領域

本發明涉及一種用于鑒定口蹄疫病毒和水泡性口炎病毒的引物組合及其應用。

背景技術

口蹄疫和水泡性口炎是牛的高度急性病毒傳染病，一般呈暴發性流行,給畜產品貿易和養牛業造成巨大的經濟損失，被世界動物衛生組織(OIE)列為A類傳染病。口蹄疫是由口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus，FMDV)引起的。水泡性口炎是由水泡性口炎病毒(Vesicular stomatitis virus，VSV)引起的。FMDV和VSV在臨床上常存在混合感染，均表現為精神不撅，體溫升高，口腔、乳頭和蹄部冠狀帶等處發生水泡及潰瘍，臨床癥狀十分相似，難以區分。因此急需建立口蹄疫和水泡性口炎的快速鑒別檢測技術，為我國FMDV和的VSV防控提供技術支持。

FMDV包括7個血清型：O型、A型、C型、SAT1型、SAT2型、SAT3型和AsiaⅠ型，目前國內流行的為O型、A型和AsiaⅠ型。VSV分為兩種血清型，NJ型(新澤西型)和IND型(印第安型)，在引起家畜發病的血清型中，NJ型占多數。

目前OIE推薦通過病毒分離、ELISA、RT-PCR、熒光RT-PCR等方法檢測FMDV和VSV。病毒分離雖然是檢測的黃金標準，但耗時耗力。RT-PCR和熒光RT-PCR快速準確，但成本較高，需要昂貴的儀器設備。環介導的體外等溫擴增檢測技術(Loop-mediated isothermalamplification，LAMP)是在PCR方法上發展起來的新興核酸檢測技術，實現了在恒溫條件下方便、快速、靈敏、特異的檢測，已在多種主要動物病原體檢測上得到應用，可在條件貧乏的基層使用。目前，國內尚未有二重RT-LAMP檢測技術的研究報導。

發明內容

本發明的目的是提供一種用于鑒定口蹄疫病毒和水泡性口炎病毒的引物組合及其應用。

本發明提供了一種引物組合，為如下(a1)或(a2)或(a3)：

(a1)由引物組Ⅰ和引物組Ⅱ組成；

(a2)所述引物組Ⅰ；

(a3)所述引物組Ⅱ；

所述引物組Ⅰ由引物FMDV-F3、引物FMDV-B3、引物FMDV–FIP和引物FMDV-BIP組成；

所述引物FMDV-F3為如下(b1)或(b2)；

(b1)序列表的序列1所示的單鏈DNA分子；

(b2)將序列1經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列1具有相同功能的DNA分子；

所述引物FMDV-B3為如下(b3)或(b4)；

(b3)序列表的序列2所示的單鏈DNA分子；

(b4)將序列2經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列2具有相同功能的DNA分子；

所述引物FMDV-FIP為如下(b5)或(b6)或(b7)或(b8)；