[發明專利]銅綠假單胞菌感染肺炎的動物模型的建立方法

有效

• 申請號: 201610117674.9
• 申請日: 2016-03-02
• 公開（公告）號: CN105749297B
• 公開（公告）日: 2019-06-07
• 發明（設計）人: 顧江;楊峰;章金勇;鄒全明;彭六生;趙莉群;敬海明;王逸麟;秦溢
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第三軍醫大學
• 主分類號: A61K49/00
• 分類號: A61K49/00;A61K35/74
• 代理公司: 重慶志合專利事務所(普通合伙) 50210
• 代理人: 胡榮琿

本發明涉及一種銅綠假單胞菌肺炎模型的建立方法，該方法有以下步驟：1)采用異氟烷深麻小鼠；2)銅綠假單胞菌對小鼠滴鼻，建立銅綠假單胞菌感染的肺炎模型。本發明所述方法能夠有效感染小鼠，成功建立銅綠假單胞菌肺炎模型。感染后的小鼠模型穩定，可用于疫苗的評價和保護性機制研究。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，特別涉及一種銅綠假單胞菌感染肺炎的動物模型的建立方法。

背景技術

銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa，PA)俗稱綠膿桿菌，為非發酵菌中的假單胞菌屬，廣泛分布于自然界、正常人皮膚、腸道、呼吸道中，在醫院病房及醫療器械中也普遍存在，是臨床上最為常見的條件致病菌之一。目前在全球范圍內，該菌已成為ICU病房、燒傷、戰創傷感染,機械通氣相關肺炎(VAP)分離率最高的病原菌之一。PA感染可發生在人體任何部位和組織，如燒傷或創傷部位、中耳、角膜、尿道和呼吸道等，也可引起心內膜炎、胃腸炎、肺炎甚至敗血癥等全身感染，全身感染死亡率超過20％。此外，由于抗生素的濫用等原因，PA的耐藥問題逐漸突出，出現了泛耐藥銅綠假單胞菌(PDR-PA)和多重耐藥銅綠假單胞菌(MDR-PA)，且耐藥性PA的分離率逐年上升。銅綠假單胞菌感染的控制已經成為目前棘手的醫學難題，對人民群眾的健康生活造成了影響。

疫苗是預防和控制銅綠假單胞菌感染最為經濟和有效的手段。而銅綠假單胞菌疫苗的研發的前提條件就是需要有合適的動物模型，可以模擬細菌引發人體疾病的過程，從而評價候選疫苗得保護性效果，闡釋疫苗的作用機理等。肺炎是銅綠假單胞菌引發最為常見的疾病之一，所國內外研究者對動物肺炎模型展開了大量的實驗，分別用恒河猴、兔、小鼠、豬、大鼠等建立模型。猴類的生理結構特征與人類非常接近，作為實驗動物最為理想。但由于數量少，價格貴，其應用受到限制。

由于考慮成本和可操作性的問題，目前國內外多采用嚙齒動物(小鼠、大鼠)作為肺炎模型動物。于柏峰等(于柏峰等，重慶醫學雜志，2011，40(2)，129-132)將6～8周齡雄性昆明小鼠，氣管切開，用富含銅綠假單胞菌PA01(BAA-47^TM)的瓊脂糖珠灌注小鼠，立即豎起小鼠,保持2min,使菌液流下進入肺內；又如鄢潔等(鄢潔等，世界最新醫學信息文摘，2015，15(27)，8-10)將6-8周齡、體重25～30g的清潔級健康雄性昆明小鼠以氯胺酮麻醉小鼠后固定，常規消毒鋪巾，嚴格無菌操作，切開頸部皮膚，鈍性分離至皮下組織，暴露上段氣管，經氣管內穿刺注入銅綠假單胞菌PA01。以上方法均可以構建肺炎模型。但是這些方法依然存在很大的問題，主要體現在以下方面：1、切開氣管的方法雖然可以保證感染劑量，但作為一種有創的方法，在操作過程中容易造成動物器官損傷甚至導致實驗動物死亡；2、操作復雜，每只小鼠都要進行手術，很難大批量開展實驗；3、已經報道的感染模型所使用的銅綠假單胞菌菌株是來自美國的標準株PA01，不能代表國內流行PA菌株的流行情況。

發明內容

本發明的目的是提供一種銅綠假單胞菌感染肺炎的動物模型的建立方法，本發明所述方法能夠有效感染小鼠，成功建立銅綠假單胞菌肺炎模型。感染后的小鼠模型穩定，可用于疫苗的評價和保護性機制研究。

本發明的技術方案是：

銅綠假單胞菌感染肺炎的動物模型的建立方法，有以下步驟：

1)采用異氟烷深麻小鼠；

2)銅綠假單胞菌對小鼠滴鼻，建立銅綠假單胞菌感染的肺炎模型。

步驟1)所述的異氟烷深麻中，具體方法，用氧氣為輸送載體以4％～6％濃度的異氟烷進行吸入誘導麻醉，待小鼠進入外科深麻醉期后，以2％～4％異氟烷濃度維持麻醉。

較好的技術方案是，用氧氣為輸送載體以5％濃度的異氟烷進行吸入誘導麻醉。

較好的技術方案是，以3％異氟烷濃度維持麻醉。