[發明專利]一種用于檢測華法林用藥相關基因分型的引物探針組合及試劑盒

有效

• 申請號: 201610116927.0
• 申請日: 2016-03-01
• 公開（公告）號: CN105648082B
• 公開（公告）日: 2019-01-25
• 發明（設計）人: 李小龍
• 申請（專利權）人: 常州市中醫醫院
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12N15/11
• 代理公司: 常州市權航專利代理有限公司 32280
• 代理人: 黃晶晶

本發明屬于生物技術領域，涉及華法林用藥指導基因檢測的引物探針組合及試劑盒。本發明提供了用于檢測華法林用藥相關基因分型的引物，引物序列如SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.6所示；還提供了用于檢測華法林用藥相關基因分型的探針，探針序列如SEQ ID NO.7～SEQ ID NO.12所示。本發明的有益效果在于通過華法林用藥指導基因檢測試劑盒的研制和應用，可以使得CYP2C9*3、CYP4F2、VKORC1這3個基因分型更加方便易行，同時保證無創診斷，為臨床醫生快速準確掌握患者遺傳情況，大大降低用藥劑量不合適而引起的醫療事故發生率，減輕用藥副作用，為提高臨床治療效果奠定基礎；檢測速度快，每份樣品檢測僅需耗時約2小時。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，涉及華法林用藥指導基因檢測的引物探針組合及試劑盒。

背景技術

華法林是臨床常用的一種適用于預防和治療血栓栓塞性疾病的藥物，是香豆素類抗凝劑的一種，在體內有對抗維生素K的作用。華法林可以抑制維生素K參與的凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ的在肝臟的合成，起效后作用和維持時間較長。主要用于防治血栓栓塞性疾病。華法林的劑量反應(國際標準化比值)關系變異很大，受許多因素的影響，一旦過量會導致出血，因此需要嚴密監測。

華法林的量效關系受遺傳因素及環境因素的影響。遺傳因素主要包括細胞色素P450基因位點的突變，肝酶對華法林S型異構體氧化代謝的活力。基因多態性已經被認為與小劑量華法林引起較高的出血并發癥的發生率相關。因此，在臨床上對患者使用華法林的劑量作出判斷時，明確其基因多態性對制訂治療方案、分析預后非常重要。

目前檢測華法林用藥相關基因遺傳多態性的最簡單的方法是PCR-RFLP，其主要原理是通過應用特異性限制性內切酶消化PCR擴增產物，并根據消化位點是否消失來判斷其變異存在與否。但該方法操作復雜，樣本量多時易造成PCR產物的交叉污染且容易出現酶切不充分或酶切過度而出現假陰性或假陽性結果，可靠性低。熒光定量PCR和多重PCR方法盡管特異性有所提高，但是這兩種方法的原理仍然是基于普通PCR的原理，熒光信號的強弱，引物特異性以及低保真Taq酶等這些因素均可造成對結果的影響。DNA測序法價格相對昂貴且操作流程繁瑣，在人類后基因組時代突飛猛進的今天，這幾種方法均不能滿足當前對華法林用藥相關基因遺傳多態性快速準確分析的要求。因此，目前研發一種用于檢測華法林代謝相關基因的檢測試劑盒十分迫切。

發明內容

本發明要解決的技術問題是：提供一種用于檢測華法林用藥相關基因分型的引物探針組合及試劑盒。

為解決上述技術問題，本發明采用的技術方案如下：一種用于檢測華法林用藥相關基因分型的引物，所述引物為如下列序列所示的引物對：

在本發明的第二方面，提供了一種用于檢測華法林用藥相關基因分型的探針，所述探針為如下列序列所示的探針：

在本發明的第三方面，提供了前述引物和探針在制備檢測CYP2C9*3、VKORC1和CYP4F2多態性位點的試劑盒中的應用。

在本發明的第四方面，提供了一種用于檢測華法林用藥相關基因分型的試劑盒，其特征在于包括前述引物和探針；優選的，所述引物和探針用量為0.5μl。所述基因檢測試劑盒還可以包括PCR反應常用試劑，如Taq酶，逆轉錄酶，緩沖液，dNTPs，MgCl₂和DEPC水等；還可以含有標準品和/或對照品。

在本發明的第五方面，提供了前述試劑盒在檢測CYP2C9*3、VKORC1和CYP4F2多態性位點中的應用。

術語“rs9923231、rs2108622”等，均是人SNP位點在NCBI數據庫的統一編號；CYP2C9*3等是對CYP2C9基因上一系列多態位點的另一種命名體系，如CYP2C9*3對應rs1057910位點。