[發(fā)明專利]與慢性乙型肝炎病毒感染相關(guān)的IL-6基因rs1524107位點標(biāo)志物及其應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610116391.2
• 申請日: 2016-03-01
• 公開（公告）號: CN105648081A
• 公開（公告）日: 2016-06-08
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 鄭敏;陳智;夏彩霞;劉艷寧;陳峰;黃春紅;樓國華;朱偉
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江大學(xué)
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 杭州中成專利事務(wù)所有限公司 33212
• 代理人: 朱瑩瑩

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及慢性乙型肝炎病毒(HepatitisBvirus，HBV)感染者病程進(jìn)展的個體易感 性。具體地，本發(fā)明涉及與HBV慢性感染者病程進(jìn)展相關(guān)的易感基因IL-6的rs1524107位點 標(biāo)志物在HBV慢性感染者病情轉(zhuǎn)歸的預(yù)警以及遺傳咨詢中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

2015年WHO更新的數(shù)據(jù)顯示，全球慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染者約2億4000萬人。 全世界更有每年超過78萬的人死于乙型肝炎的各種并發(fā)癥，包括肝硬化和肝癌。我國是病毒 性肝炎高發(fā)區(qū)，現(xiàn)有的慢性HBV感染者約9300萬人，其中慢性乙型肝炎(CHB)患者約2000 萬人。一般慢性乙型肝炎是一個漸進(jìn)發(fā)展的過程，但是部分病人并沒有經(jīng)歷明顯的慢性乙型肝 炎的過程就突然出現(xiàn)肝硬化的癥狀和體征，有些患者甚至到了失代償階段才被發(fā)現(xiàn)。于是，對 慢性乙型肝炎肝硬化科學(xué)地預(yù)警預(yù)測和早期診斷早期干預(yù)對于控制病情發(fā)展和降低病死率至 關(guān)重要。

IL-6是由184個氨基酸組成的經(jīng)典的細(xì)胞因子，它的基因位于7號染色體上。IL-6有2 個受體：IL-6受體(IL-6R)和gp130。IL-6R有2種形式，膜型IL-6R和可溶性IL-6R(sIL-6R)。 IL-6通過膜型IL-6R介導(dǎo)的是經(jīng)典的信號通路，通過sIL-6R介導(dǎo)的是反式信號通路。對于健 康人來說，血漿水平的IL-6幾乎測不到。但是，在慢性炎癥性疾病中，比如慢性乙型肝炎， 可以檢測到異常分泌的血漿IL-6水平。有研究顯示，IL-6水平在慢性乙型肝炎(CHB)病人中 比在健康人中顯著升高，并且相比CHB病人，IL-6水平在晚期肝病(肝硬化或者肝癌)病人 中表達(dá)的更顯著。而該基因的多態(tài)性可能改變其表達(dá)或者結(jié)合活性，從而影響肝損傷和疾病嚴(yán) 重程度。因此，IL-6基因多態(tài)性分析對于CHB患者病情轉(zhuǎn)歸的判斷和預(yù)警具有重要價值，特 別是對于慢性乙型肝炎進(jìn)展為肝硬化的預(yù)警更有不可替代的意義。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決以上問題，本發(fā)明提供了一種與慢性乙型肝炎病情轉(zhuǎn)歸，尤其是與乙型肝炎肝硬 化轉(zhuǎn)歸相關(guān)的IL-6基因SNPrs1524107位點標(biāo)志物及其檢測試劑和檢測方法。

與慢性乙型肝炎病情轉(zhuǎn)歸相關(guān)的IL-6基因SNPrs1524107位點標(biāo)志物，IL-6基因的 rs1524107位點表現(xiàn)為TT基因型。

與乙型肝炎肝硬化轉(zhuǎn)歸相關(guān)的IL-6基因SNPrs1524107位點標(biāo)志物，IL-6基因的 rs1524107位點表現(xiàn)為TT基因型。

一種試劑，用于檢測IL-6基因的rs1524107位點的試劑。

另外，本發(fā)明還提供了一種檢測與慢性乙型肝炎病情轉(zhuǎn)歸相關(guān)的IL-6基因SNP位點 rs1524107標(biāo)志物的Taqman探針法，包括如下步驟：

1)于ABI公司購買用于檢測IL-6基因rs1524107位點的引物和Taqman探針，并對樣本 基因組DNA在RocheLC480ⅡPCR儀上進(jìn)行特異性PCR擴(kuò)增，所述Taqman探針被兩種 熒光染料Vic、Fam雙標(biāo)記，該探針分別是針對雙等位SNP的不同基因型，只有完全匹 配的探針才能擴(kuò)增出各自對應(yīng)的基因型；

2)按下列條件進(jìn)行反應(yīng)：起始95℃預(yù)熱10min，然后95℃變性10s，60℃退火和 延伸30s，循環(huán)45次；產(chǎn)物在RocheLC480Ⅱ型熒光定量PCR儀上掃描讀取數(shù)據(jù)，分 析得出研究對象的基因型。

用于檢測IL-6基因的rs1524107位點表現(xiàn)為TT基因型的試劑在制備用于HBV慢性感染者 病情轉(zhuǎn)歸的診斷試劑盒中的應(yīng)用。

用于檢測IL-6基因的rs1524107位點表現(xiàn)為TT基因型的試劑在制備用于乙型肝炎感染人 群疾病向肝硬化發(fā)展診斷試劑盒中的應(yīng)用。

發(fā)明人首先對IL-6基因SNP位點進(jìn)行了篩選。先通過查詢大量相關(guān)文獻(xiàn)或記錄，篩選出 可能和疾病之間存在關(guān)聯(lián)的SNP位點；然后在第二代HapMap數(shù)據(jù)庫中，以MAF>5％為入選標(biāo)準(zhǔn)， 篩選了rs1524107位點。因此本發(fā)明鑒定了與慢性乙型肝炎病情轉(zhuǎn)歸相關(guān)的IL-6基因的SNP 位點。

本發(fā)明還提供了一種檢測與慢性乙型肝炎病情轉(zhuǎn)歸相關(guān)的IL-6基因SNP位點rs1524107 的Taqman探針法。

如上所述，本發(fā)明采用了一種檢測與慢性乙型肝炎病情轉(zhuǎn)歸相關(guān)的IL-6基因SNP位點的 方法，該方法為Taqman探針法，具體地說，包括了如下步驟：