[發(fā)明專利]與乙型肝炎肝硬化相關(guān)的IL-6基因rs10499563位點(diǎn)標(biāo)志物及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610116342.9
• 申請(qǐng)日: 2016-03-01
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN105586425B
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-08-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 鄭敏;陳智;夏彩霞;劉艷寧;陳峰;黃春紅;樓國(guó)華;朱偉
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 浙江大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/6883
• 分類號(hào): C12Q1/6883;C12N15/11
• 代理公司: 杭州中成專利事務(wù)所有限公司 33212
• 代理人: 朱瑩瑩

本發(fā)明涉及乙型肝炎肝硬化患者的個(gè)體易感性。具體地，本發(fā)明涉及與乙型肝炎肝硬化相關(guān)的易感基因IL?6的rs10499563位點(diǎn)標(biāo)志物在乙型肝炎肝硬化患者評(píng)估中的應(yīng)用。本發(fā)明提供了一種與乙型肝炎肝硬化相關(guān)的IL?6基因rs10499563位點(diǎn)標(biāo)志物及其檢測(cè)試劑和檢測(cè)方法。本發(fā)明還提供了與乙型肝炎肝硬化患者評(píng)估相關(guān)的IL?6基因的SNP位點(diǎn)，即IL?6基因rs10499563位點(diǎn)T等位基因及其在乙型肝炎肝硬化患者評(píng)估中的應(yīng)用。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及乙型肝炎肝硬化患者的個(gè)體易感性。具體地，本發(fā)明涉及與乙型肝炎肝硬化相關(guān)的易感基因IL-6的rs10499563位點(diǎn)標(biāo)志物在乙型肝炎肝硬化患者評(píng)估中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

2015年WHO更新的數(shù)據(jù)顯示，全球慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染者約2億4000萬(wàn)人。全世界更有每年超過(guò)78萬(wàn)的人死于乙型肝炎的各種并發(fā)癥，包括肝硬化和肝癌。我國(guó)是病毒性肝炎高發(fā)區(qū)，現(xiàn)有的慢性HBV感染者約9300萬(wàn)人，其中慢性乙型肝炎(CHB)患者約2000萬(wàn)人。一般慢性乙型肝炎是漸進(jìn)發(fā)展引起并發(fā)癥，但是部分病人并沒(méi)有經(jīng)歷明顯的慢性乙型肝炎的過(guò)程就突然出現(xiàn)肝硬化的癥狀和體征，有些患者甚至到了失代償階段才被發(fā)現(xiàn)。于是，對(duì)慢性乙型肝炎肝硬化科學(xué)地預(yù)警預(yù)測(cè)和早期診斷早期干預(yù)對(duì)于控制病情發(fā)展和降低病死率至關(guān)重要。

IL-6是由184個(gè)氨基酸組成的經(jīng)典的細(xì)胞因子，它的基因位于7號(hào)染色體上。IL-6有2個(gè)受體：IL-6受體(IL-6R)和gp130。IL-6R有2種形式，膜型IL-6R和可溶性IL-6R(sIL-6R)。IL-6通過(guò)膜型IL-6R介導(dǎo)的是經(jīng)典的信號(hào)通路，通過(guò)sIL-6R介導(dǎo)的是反式信號(hào)通路。對(duì)于健康人來(lái)說(shuō)，血漿水平的IL-6幾乎測(cè)不到。但是，在慢性炎癥性疾病中，比如慢性乙型肝炎，可以檢測(cè)到異常分泌的血漿IL-6水平。有研究顯示，IL-6水平在慢性乙型肝炎(CHB)病人中比在健康人中顯著升高，并且相比CHB病人，IL-6水平在晚期肝病(肝硬化或者肝癌)病人中表達(dá)的更顯著。而該基因的多態(tài)性可能改變其表達(dá)或者結(jié)合活性，從而影響肝損傷和疾病嚴(yán)重程度。因此，IL-6基因多態(tài)性分析對(duì)于CHB患者病情轉(zhuǎn)歸的判斷和預(yù)警具有重要價(jià)值，特別是對(duì)于慢性乙型肝炎進(jìn)展為肝硬化的預(yù)警更有不可替代的意義。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決以上問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種與乙型肝炎肝硬化相關(guān)的IL-6基因rs10499563位點(diǎn)標(biāo)志物及其檢測(cè)試劑和檢測(cè)方法。

與乙型肝炎肝硬化相關(guān)的IL-6基因rs10499563位點(diǎn)標(biāo)志物，IL-6基因的rs10499563位點(diǎn)表現(xiàn)為T(mén)等位基因。

一種試劑，用于檢測(cè)IL-6基因rs10499563位點(diǎn)的試劑。

一種試劑盒，包含用于檢測(cè)IL-6基因rs10499563位點(diǎn)的試劑和PCR技術(shù)常用的試劑。

一種檢測(cè)IL-6基因rs10499563位點(diǎn)標(biāo)志物的方法，采用Taqman探針?lè)ǎㄈ缦虏襟E：

1)于ABI公司購(gòu)買(mǎi)用于IL-6基因rs10499563位點(diǎn)的檢測(cè)引物和Taqman探針，并對(duì)樣本基因組DNA在Roche LC480ⅡPCR儀上進(jìn)行特異性PCR擴(kuò)增，所述Taqman探針被兩種熒光染料Vic、Fam雙標(biāo)記，該探針?lè)謩e是針對(duì)雙等位SNP的不同基因型，只有完全匹配的探針才能擴(kuò)增出各自對(duì)應(yīng)的基因型；

2)按下列條件進(jìn)行反應(yīng)：起始95℃預(yù)熱10min，然后95℃變性10s，60℃退火和延伸30s，循環(huán)45次；產(chǎn)物在Roche LC480Ⅱ型熒光定量PCR儀上掃描讀取數(shù)據(jù)，分析得出研究對(duì)象的基因型。

用于檢測(cè)IL-6基因rs10499563位點(diǎn)的試劑在制備用于乙型肝炎肝硬化診斷試劑盒中的應(yīng)用。