[發(fā)明專利]骨肉瘤轉(zhuǎn)移抑制劑組合物及其應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610115454.2
• 申請日: 2016-03-01
• 公開（公告）號: CN105727294A
• 公開（公告）日: 2016-07-06
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 林慧芳;楊承剛;任靜
• 申請（專利權(quán)）人: 北京泱深生物信息技術(shù)有限公司
• 主分類號: A61K45/00
• 分類號: A61K45/00;A61K31/7088;A61P35/00;C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及分子生物學(xué)領(lǐng)域，具體的涉及骨肉瘤轉(zhuǎn)移抑制劑組合物及其應(yīng)用，更具體的涉及mir-6884和/或其成熟miRNA在診斷和抑制骨肉瘤轉(zhuǎn)移中的新用途。

背景技術(shù)

骨肉瘤(osteosarcoma，OSA)是常見的惡性骨腫瘤，是從間質(zhì)細胞系發(fā)展而來，腫瘤迅速生長是由于腫瘤經(jīng)軟骨階段直接或間接形成腫瘤骨樣組織和骨組織，幾乎所有骨肉瘤轉(zhuǎn)移均經(jīng)血液轉(zhuǎn)移至肺，少數(shù)轉(zhuǎn)移至腦、腎等內(nèi)臟器官及經(jīng)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。骨肉瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移嚴重影響患者的生活質(zhì)量和預(yù)后。基因水平的治療已經(jīng)成為廣大學(xué)者的研究熱點，但是目前仍缺少骨肉瘤診斷和治療的有效靶標，進一步尋找分子生物標記，將具有重要的理論和臨床應(yīng)用價值。同時如能獲得骨肉瘤血清診斷標志物，將對骨肉瘤的診斷和治療帶來深遠的影響。miRNA是一種內(nèi)源性非編碼小分子，通過特異性結(jié)合靶基因來調(diào)控基因的表達。研究表明miRNA參與各種各樣的調(diào)節(jié)途徑，包括發(fā)育、病毒防御、造血過程、器官形成、細胞增殖和凋亡、脂肪代謝等，具有重要的基因表達調(diào)控作用。

本發(fā)明基于高通量測序方法，對5例轉(zhuǎn)移性骨肉瘤患者及5名健康對照人群進行測序，獲得其miRNA的表達數(shù)據(jù)，進而進行生物信息學(xué)分析，選取后備miRNA進行分子生物學(xué)驗證及靶標驗證，結(jié)果顯示，本發(fā)明提供的mir-6884與骨肉瘤密切相關(guān)，在轉(zhuǎn)移性骨肉瘤血液中低表達，促進miR-6884-5p的表達可有效降低骨肉瘤細胞的遷移和侵襲，本發(fā)明提供的骨肉瘤診治靶點可用于臨床診斷及預(yù)防檢測骨肉瘤轉(zhuǎn)移，具有很好的實際應(yīng)用價值。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種抑制骨肉瘤試劑，所述試劑包含：

(a)上調(diào)mir-6884和/或其成熟miRNA的轉(zhuǎn)錄和/或促進mir-6884和/或其成熟miRNA的活性的試劑；

(b)藥劑學(xué)上能接受的載體。

mir-6884的序列見序列表SEQIDNO1，mir-6884的成熟miRNA為miR-6884-5p和miR-6884-3p，序列見序列表SEQIDNO2和SEQIDNO3。

優(yōu)選的，采用基于RNA的microRNA功能獲得性技術(shù)和/或基因特異性miRMimics技術(shù)上調(diào)mir-6884和/或其成熟miRNA的轉(zhuǎn)錄和/或促進mir-6884和/或其成熟miRNA的活性。優(yōu)選人工合成mir-6884的短發(fā)夾RNA(shorthairpinRNA，shRNA)或通過調(diào)控啟動子上調(diào)mir-6884和/或其成熟miRNA的表達。

進一步的，所述試劑具體為抑制骨肉瘤轉(zhuǎn)移試劑。

本發(fā)明的目的在于提供mir-6884和/或其成熟miRNA在制備抑制骨肉瘤試劑中的應(yīng)用。

進一步，mir-6884和/或其成熟miRNA在制備抑制骨肉瘤轉(zhuǎn)移試劑中的應(yīng)用。

進一步，抑制骨肉瘤試劑包括上調(diào)mir-6884和/或其成熟miRNA的轉(zhuǎn)錄和/或促進mir-6884和/或其成熟miRNA的活性的試劑。

優(yōu)選的，采用基于RNA的microRNA功能獲得性技術(shù)和/或基因特異性miRMimics技術(shù)上調(diào)mir-6884和/或其成熟miRNA的轉(zhuǎn)錄和/或促進mir-6884和/或其成熟miRNA的活性。優(yōu)選人工合成mir-6884的短發(fā)夾RNA或通過調(diào)控啟動子上調(diào)mir-6884和/或其成熟miRNA。

本發(fā)明的目的在于提供mir-6884和/或其成熟miRNA在制備診斷骨肉瘤試劑中的應(yīng)用。

進一步，診斷骨肉瘤試劑為診斷骨肉瘤轉(zhuǎn)移試劑。

優(yōu)選的，診斷骨肉瘤試劑為診斷骨肉瘤細胞侵襲和遷移的試劑。

進一步，mir-6884和/或其成熟miRNA在轉(zhuǎn)移性骨肉瘤中低表達。

進一步，診斷骨肉瘤試劑包括基于高通量測序方法和/或基于定量PCR方法和/或基于探針雜交方法檢測骨肉瘤樣本中mir-6884和/或其成熟miRNA的轉(zhuǎn)錄或基于免疫檢測方法檢測骨肉瘤樣本中mir-6884和/或其成熟miRNA調(diào)控的靶基因的表達情況，優(yōu)選采用northern雜交方法、miRNA表達譜芯片、核酶保護分析技術(shù)、RAKE法、原位雜交、基于微球的流式細胞術(shù)檢測骨肉瘤樣本中mir-6884和/或其成熟miRNA的轉(zhuǎn)錄。

優(yōu)選的，基于定量PCR方法包括特異性擴增mir-6884和/或其成熟miRNA的引物，進一步優(yōu)選，特異性擴增mir-6884的引物序列為SEQIDNO4；基于探針雜交方法包括與mir-6884和/或其成熟miRNA的核酸序列雜交的探針。