[發明專利]miR-21-3p在制備用于檢測早期急性腎損傷的試劑中的用途

在審

• 申請號: 201610109838.3
• 申請日: 2016-02-29
• 公開（公告）號: CN105734127A
• 公開（公告）日: 2016-07-06
• 發明（設計）人: 張澤安;浦雪艷;沈佳音;鄧中平
• 申請（專利權）人: 上海中醫藥大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 南京鐘山專利代理有限公司 32252
• 代理人: 靳靜

技術領域

本發明涉及生物檢測領域，特別涉及馬兜鈴酸類中藥致急性腎損傷的早期檢測的生物標記物，更具體涉及miR-21-3p在制備用于檢測早期急性腎損傷的試劑中的用途。

背景技術

目前，急性腎損傷(AKI)仍然是診斷及治療的極大難題，當血液及尿液生化指標尿素氮(BUN)、肌酐(CREA)等變化明顯時，腎臟的損傷已經很嚴重，很難恢復了，因此，尋找新的生物標志物來盡早檢測AKI已經成為亟待解決的問題。

中藥是我國傳統醫學的寶貴財富，一直以來都以其較好的臨床療效和較少的副作用而受到人們的親睞，在世界范圍內也得到了廣泛的應用。但無法避免的是，中藥存在一定的毒性，馬兜鈴酸的腎毒性就是其中之一，但是當常規的腎毒性檢測指標(如Scr、BUN等指標)出現異常時，腎臟已經受到了較嚴重的損傷，因此篩選中藥早期腎毒性生物指標監測腎毒性已成為亟待解決的問題。

發明內容

為克服現有技術中的上述問題，本發明提供了一種miR-21-3p在制備用于檢測早期急性腎損傷的試劑中的用途，提供了一種馬兜鈴酸類中藥早期急性腎損傷的生物標志物，為臨床醫學和生物醫藥發展提供了一種新方案。

本發明采用了以下的技術方案：

miR-21-3p在制備用于檢測早期急性腎損傷的試劑中的用途，其中急性腎損傷由含馬兜鈴酸的中藥所致。

優選地，馬兜鈴酸為馬兜鈴酸A。

進一步地，早期急性腎損傷后，miR-21-3p在腎臟、血漿中表達上調。

進一步地，含馬兜鈴酸的中藥引起急性腎損傷的給藥途徑為腹腔注射或口服。

進一步地，檢測包括以下步驟：

(1)檢測血漿中miR-21-3p的表達；

(2)基于步驟(1)中的檢測結果判斷急性腎損傷的發病可能性。

優選地，在步驟(1)中，采用染料法實時熒光定量PCR檢測血漿中miR-21-3p的表達。

其中，miR-21-3p的核苷酸序列為：GACAGCCCATCGACT。

與現有技術相比，本發明具有以下優點：

本發明提供了一種miR-21-3p在制備用于檢測早期急性腎損傷的試劑中的用途，即，提供了一種可檢測早期急性腎損傷的生物標志物miR-21-3p。本發明可方便、準確地檢測出早期急性腎損傷，為臨床醫學提供了一種新方案，具有良好而廣泛的應用前景。在本發明中，選用研究公認的具有腎毒性的含馬兜鈴酸的中藥，更具體地，馬兜鈴酸A，從microRNA的角度篩選出腎毒性早期生物標志物，建立了中藥腎毒性的可靠的早期生物學監測指標，同時可預期地應用到其他類型急性腎損傷中，大大方便了急性腎損傷的早期診斷，可盡早地對患者進行確診并調整治療方案，因而本發明在急性腎損傷的檢測和臨床醫學方面邁出了劃時代的一步，具有廣泛而良好的應用前景。

附圖說明

圖1為實施例1的大鼠給藥后隨時間的體重變化圖。

圖2為實施例1的大鼠的腎臟病理組織學圖片。

圖3為實施例1的染料法實時定量PCR檢測的大鼠腎臟中miR-21-3P的表達圖。

圖4為實施例1中大鼠血漿中miR-21-3P的表達圖。

圖5為實施例1中40mg/kg劑量組大鼠給藥第二天后miR-21-3P在不同組織中的表達圖。

圖6為實施例2的大鼠的血漿中miR-21-3P的表達圖。

具體實施方式

下面結合具體實施例對本發明作進一步詳細說明。

實施例1

馬兜鈴酸A經腹腔注射給予雄性Wistar大鼠6天，建立馬兜鈴酸A致急性腎損傷的模型。

實驗過程：對4-5周齡，體重約80-100g的雄性Wistar大鼠給藥，首次給藥前至少適應3天，根據適應期動物的健康狀況和體重選自適宜的大鼠，按照體重均衡性原則隨機分成4組。每天給藥1次，連續給藥6天，其中給藥的溶媒為PEG400溶液與去離子水的體積比為1：1的混合溶劑。給藥期結束后，大鼠經由腹主動脈采集血液及組織樣本。采集時間：D2、D4、D6。動物分組為對照組、10mg/kg劑量組、20mg/kg劑量組、40mg/kg劑量組。

實驗組動物在給藥期D2、D4、D6經戊巴比妥鈉麻醉后解剖，每次每組解剖5只大鼠，制備40mg/kg劑量動物腎臟的miRNA的芯片，檢測出腎臟特異性表達上調的miRNA，即miR-21-3P，通過染料法實時熒光定量PCR驗證實驗證明上調確實存在。