[發(fā)明專利]一種基于高效液相色譜法檢測卷煙煙氣所含角鯊烯的樣品液制備方法

在審

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• 申請日: 2016-02-29
• 公開（公告）號: CN105738520A
• 公開（公告）日: 2016-07-06
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張紀利;盧健;韋建玉;金亞波;胡亞杰;梁永進;黃崇峻;萬樹青;陳澤鵬
• 申請（專利權(quán)）人: 廣西中煙工業(yè)有限責(zé)任公司;華南農(nóng)業(yè)大學(xué);中國煙草總公司廣東省公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 任重

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及卷煙煙氣中成分的檢測技術(shù)領(lǐng)域，更具體地，涉及一種基于高效液相色譜法檢測卷煙煙氣所含角鯊烯的樣品液制備方法。

背景技術(shù)

角鯊烯最初是從鯊魚的肝油中發(fā)現(xiàn)的，1914年被命名為Squalene,其化學(xué)名稱為2,6,10,15,19,23--六甲基--2,6,10,14,18,22--二十四碳六烯，屬開鏈三萜類化合物。

角鯊烯具有提高人體內(nèi)超氧化物歧化酶(SOD)活性、增強機體抗氧化性和免疫能力、改善性功能、抗衰老、抗疲勞、抗腫瘤等多種生理功能，是一種無毒性的具有防病治病作用的生物活性物質(zhì)。最近研究發(fā)現(xiàn)角鯊烯對人體還具有解毒作用，可移除組織中的脂溶性毒素。已有研究表明：在煙絲中添加一定量的角鯊烯，可降低煙氣中幾種有害物質(zhì)和自由基含量，表明角鯊烯具有獨特降害作用，目前開發(fā)利用角鯊烯已成為科技界和煙草業(yè)研究的熱點。

2014年4月，國家煙草專賣局下發(fā)關(guān)于加快卷煙降焦減害技術(shù)成果推廣應(yīng)用的通知(國煙辦綜[2014]218號)，提出要加大卷煙減害技術(shù)重大專項研究成果的應(yīng)用推廣力度，要采取針對性技術(shù)措施加快卷煙降焦減害步伐。為了配合國家局加快卷煙降焦減害步伐的重大決策，本申請人在完成中國煙草總公司2013年度科技面上項目《廣西主流煙氣天然抗氧化劑角鯊烯的生態(tài)累積與減害研究》(中煙辦[2013]149號)研究基礎(chǔ)上，迫切需要建立一種可行的適于標準的主流煙氣角鯊烯含量的檢測方法。

但是，目前國內(nèi)外還沒有可參考的煙氣中尤其是主流煙氣中角鯊烯定性和定量的檢測方法，因此，在煙草行業(yè)建立烤煙中角鯊烯定性和定量的檢測方法具有前瞻性，也是十分必要的。而在煙氣中角鯊烯的檢測中，良好的樣品前處理方法對獲得準確科學(xué)的檢測結(jié)果起到關(guān)鍵性作用。在確定的檢測條件下，采用不同提取劑提取樣品中角鯊烯，其提取效率、提取操作用時等因素都是必須考慮的重要因素，各個因素之間又是相互影響的關(guān)系，目前未見基于高效液相色譜法檢測煙葉中角鯊烯的樣品前處理研究報道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是填補現(xiàn)有煙氣中角鯊烯的檢測技術(shù)不足，尤其是適于高效液相色譜法檢測煙氣中角鯊烯的樣品前處理方法的不足，提供一種基于高效液相色譜法檢測卷煙煙氣所含角鯊烯的樣品液制備方法。

本發(fā)明的技術(shù)方案通過以下技術(shù)方案予以實現(xiàn)：

提供一種基于高效液相色譜法檢測卷煙煙氣所含角鯊烯的樣品液制備方法，包括以下步驟：

S11.收集煙氣固粒相物并提取：抽吸卷煙，采用濾片收集煙氣固粒相物；

S12.提取：將收集了煙氣固粒相物劍橋濾片放入錐形瓶中，加入提取劑，常溫下振蕩提取，得提取液；

S13.凈化：取步驟S12所得提取液，經(jīng)過再處理后得到的溶液再經(jīng)過柱，丙酮洗脫，收集洗脫液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，用色譜乙腈定容，過0.22μm濾膜即得待測樣品液；

其中，步驟S12所述提取劑為丙酮；

步驟S13所述再處理指的是將步驟S12所得提取液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，用正己烷溶解，再用正己烷洗滌；

步驟S13所述過柱是是采用N-丙基乙二胺固相固相萃取柱。

優(yōu)選地，步驟S11所述抽吸卷煙是按照GB/T16450標準。步驟S11所述濾片為Φ92mm的劍橋濾片。

優(yōu)選地，步驟S12所述振蕩提取是用搖床以130轉(zhuǎn)/min振蕩20min。

優(yōu)選地，步驟S13所述洗滌的次數(shù)為3次。

優(yōu)選地，S13所述N-丙基乙二胺固相固相萃取柱的裝柱方法為稱取0.3gN-丙基乙二胺固相吸附劑裝柱，其上方加1.0g無水硫酸鈉。

基于所述樣品前處理方法，本發(fā)明同時提供一種高效液相色譜法檢測主流煙氣中所含角鯊烯的方法，以甲醇和乙腈為流動相，采用填有粒徑5μm的高效固定相的柱色譜分離技術(shù)，精確吸取10μL待測樣品液注入高效液相色譜儀進行色譜分離，用紫外吸收檢測器，于210nm波長處檢測角鯊烯的吸收值，采用外標法，根據(jù)吸收峰面積計算其含量。

所述高效液相色譜法檢測主流煙氣中所含角鯊烯的方法包括以下步驟：

S1.樣品經(jīng)前處理得到樣品液；

S2.配制標準溶液，建立標準曲線；

S3.檢測：取樣品液液注入高效液相色譜儀檢測；

S4.采用外標法，根據(jù)吸收峰面積計算角鯊烯含量。

所述檢測的檢測條件為：

(1)高效液相色譜儀HPLC(Agilent1100)配紫外檢測器；

(2)色譜柱：C18柱，5μm，4.6×250mm；

(3)柱溫：20℃；