[發明專利]人誘導性多能干細胞誘導為間充質干細胞的方法有效
| 申請號： | 201610107276.9 | 申請日： | 2016-02-25 |
| 公開（公告）號： | CN105754936B | 公開（公告）日： | 2018-06-08 |
| 發明（設計）人： | 付清玲;高文翔;孫悅奇 | 申請（專利權）人： | 付清玲 |
| 主分類號： | C12N5/0775 | 分類號： | C12N5/0775;C12N5/071 |
| 代理公司： | 廣州三環專利商標代理有限公司 44202 | 代理人： | 郝傳鑫;宋靜娜 |
| 地址： | 510080 廣東省*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 間充質干細胞 誘導性多能干細胞 誘導 傳代 細胞治療產品 誘導培養基 分選技術 生存能力 培養基 流式 老化 | ||
1.一種人誘導性多能干細胞誘導為間充質干細胞的方法，其特征在于：包括以下步驟：
1)將人誘導性多能干細胞置于Matrigel鋪板的載體上，使用iPSc-MSC誘導培養基誘導所述人誘導性多能干細胞以將其轉化為間充質干細胞，所述iPSc-MSC誘導培養基為添加有8-18％的血清及50-100μmol/L的L-抗壞血酸的α-MEM；
2)以增殖性的方式培養步驟1)中得到的間充質干細胞；
所述步驟2)通過以下步驟實施：
21)消化步驟1)得到的間充質干細胞，將其傳代至明膠鋪板的載體上，使用維持培養基來培養間充質干細胞，得到第一代間充質干細胞；所述維持培養基為添加有8-15％的血清、5-10ng/mL的bFGF以及10-20ng/mL的內皮生長因子的DMEM高糖培養基；
22)將步驟21)得到第一代間充質干細胞再次傳代至明膠鋪板的載體上，使用所述維持培養基培養，得到第二代間充質干細胞；
23)待第二代間充質干細胞長滿后，使用所述維持培養基按正常的間充質干細胞培養方法進行培養及傳代。
2.根據權利要求1所述的人誘導性多能干細胞誘導為間充質干細胞的方法，其特征在于：所述步驟1)中血清為FBS。
3.根據權利要求1所述的人誘導性多能干細胞誘導為間充質干細胞的方法，其特征在于：所述步驟1)中的誘導時間為14-21天。
4.根據權利要求1所述的人誘導性多能干細胞誘導為間充質干細胞的方法，其特征在于：所述步驟21)中血清為FBS。
5.根據權利要求1所述的人誘導性多能干細胞誘導為間充質干細胞的方法，其特征在于：所述步驟21)中，消化是指利用消化酶消化5-15min，傳代比例為1:1～1:3；培養時間為2～6d。
6.根據權利要求1所述的人誘導性多能干細胞誘導為間充質干細胞的方法，其特征在于：所述步驟22)中，傳代比例為1:1～1:3。
7.一種間充質干細胞，其特征在于：所述間充質干細胞由權利要求1～6中任一權利要求所述的人誘導性多能干細胞誘導為間充質干細胞的方法產生。
8.一種細胞治療產品，其特征在于：其包括權利要求7所述的間充質干細胞。
9.一種用于培養細胞的飼養細胞，其特征在于：其包括權利要求7所述的間充質干細胞。
10.一種用于將人誘導性多能干細胞誘導為間充質干細胞的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒包括：
a.iPSc-MSC誘導培養基，其為添加有8-18％的血清及50-100μmol/L的L-抗壞血酸的α-MEM；
b.維持培養基，其為添加有8-15％的血清、5-10ng/mL的bFGF以及10-20ng/mL的內皮生長因子的DMEM高糖培養基。
11.根據權利要求10所述的用于將人誘導性多能干細胞誘導為間充質干細胞的試劑盒，其特征在于：所述血清為FBS。
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