[發明專利]亮菌漆酶基因及其重組畢赤酵母工程菌和應用

有效

• 申請號: 201610107171.3
• 申請日: 2016-02-26
• 公開（公告）號: CN105543250B
• 公開（公告）日: 2018-12-21
• 發明（設計）人: 詹潔;趙帥;凌慶枝;范業賡
• 申請（專利權）人: 廣西大學
• 主分類號: C12N15/53
• 分類號: C12N15/53;C12N9/02;C12N1/19;C12N15/81;A62D3/02;A62D101/28
• 代理公司: 廣西南寧公平知識產權代理有限公司 45104
• 代理人: 楊立華

1.一種亮菌漆酶基因，其特征在于為序列表SEQ.ID.NO.1的堿基序列。

2.一種亮菌漆酶，其特征在于為序列表SEQ.ID.NO.2的氨基酸序列。

3.一種重組畢赤酵母工程菌，其特征在于攜帶含權利要求1所述亮菌漆酶基因的表達載體。

4.權利要求3所述重組畢赤酵母工程菌的構建方法，其特征在于：將權利要求1所述亮菌漆酶基因連入到畢赤酵母表達載體pPIC9K，得到重組表達載體pPIC9K-LacAT；再將重組表達載體pPIC9K-LacAT質粒線性化后電轉化至GS115菌株，得到異源重組酵母工程菌GS115-PIC9K-LacAT。

5.根據權利要求4所述重組畢赤酵母工程菌的構建方法，其特征在于按以下操作進行：取20μl線性化的單拷貝質粒加入80μl GS115感受態細胞并輕輕混勻，轉入2mm預冷電轉杯，冰上放置5min，放入電轉儀，電擊，電壓：1500V，電擊時間5.2ms，電擊完成后，立即加入1ml1M預冷的山梨醇，混勻后轉移到1.5ml離心管中，30℃，靜止1-2h，每200μl涂一塊含0.5mg/ml G418的酵母MD平板，30℃，培養2d，形成分散，飽滿的單克隆。

6.權利要求3所述重組畢赤酵母工程菌在發酵獲取重組亮菌漆酶中的應用。

7.權利要求2所述亮菌漆酶在催化氯酚降解中的應用。

8.根據權利要求7所述的應用，其特征在于：所述氯酚為2,4-二氯苯酚。

9.根據權利要求7所述的應用，其特征在于：所述亮菌漆酶在55℃、pH 3.5的條件下催化氯酚降解。