[發(fā)明專利]亮菌漆酶基因及其重組畢赤酵母工程菌和應(yīng)用有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201610107171.3 | 申請日： | 2016-02-26 |
| 公開（公告）號： | CN105543250B | 公開（公告）日： | 2018-12-21 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 詹潔;趙帥;凌慶枝;范業(yè)賡 | 申請（專利權(quán)）人： | 廣西大學(xué) |
| 主分類號： | C12N15/53 | 分類號： | C12N15/53;C12N9/02;C12N1/19;C12N15/81;A62D3/02;A62D101/28 |
| 代理公司： | 廣西南寧公平知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 45104 | 代理人： | 楊立華 |
| 地址： | 530004 廣西壯族*** | 國省代碼： | 廣西;45 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 亮菌漆酶 基因 及其 重組 酵母 工程 應(yīng)用 | ||
1.一種亮菌漆酶基因，其特征在于為序列表SEQ.ID.NO.1的堿基序列。
2.一種亮菌漆酶，其特征在于為序列表SEQ.ID.NO.2的氨基酸序列。
3.一種重組畢赤酵母工程菌，其特征在于攜帶含權(quán)利要求1所述亮菌漆酶基因的表達(dá)載體。
4.權(quán)利要求3所述重組畢赤酵母工程菌的構(gòu)建方法，其特征在于：將權(quán)利要求1所述亮菌漆酶基因連入到畢赤酵母表達(dá)載體pPIC9K，得到重組表達(dá)載體pPIC9K-LacAT；再將重組表達(dá)載體pPIC9K-LacAT質(zhì)粒線性化后電轉(zhuǎn)化至GS115菌株，得到異源重組酵母工程菌GS115-PIC9K-LacAT。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述重組畢赤酵母工程菌的構(gòu)建方法，其特征在于按以下操作進(jìn)行：取20μl線性化的單拷貝質(zhì)粒加入80μl GS115感受態(tài)細(xì)胞并輕輕混勻，轉(zhuǎn)入2mm預(yù)冷電轉(zhuǎn)杯，冰上放置5min，放入電轉(zhuǎn)儀，電擊，電壓：1500V，電擊時間5.2ms，電擊完成后，立即加入1ml1M預(yù)冷的山梨醇，混勻后轉(zhuǎn)移到1.5ml離心管中，30℃，靜止1-2h，每200μl涂一塊含0.5mg/ml G418的酵母MD平板，30℃，培養(yǎng)2d，形成分散，飽滿的單克隆。
6.權(quán)利要求3所述重組畢赤酵母工程菌在發(fā)酵獲取重組亮菌漆酶中的應(yīng)用。
7.權(quán)利要求2所述亮菌漆酶在催化氯酚降解中的應(yīng)用。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于：所述氯酚為2,4-二氯苯酚。
9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于：所述亮菌漆酶在55℃、pH 3.5的條件下催化氯酚降解。
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