[發明專利]一種以適配體為支架原位合成納米銀的SERS方法

有效

• 申請號: 201610105916.2
• 申請日: 2016-02-26
• 公開（公告）號: CN105738342B
• 公開（公告）日: 2018-09-25
• 發明（設計）人: 高瑋村;夏志平;李乾學;李志萍;曲晗;李博;王習文
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍軍事醫學科學院軍事獸醫研究所
• 主分類號: G01N21/65
• 分類號: G01N21/65
• 代理公司: 吉林長春新紀元專利代理有限責任公司 22100
• 代理人: 陳宏偉

本發明公開了一種以適配體為支架原位合成納米銀的SERS方法，是以適配體為支架在病原菌表面原位合成納米銀殼達到目標菌SERS信號特異性增強的方法，目的旨在特異性增強目標菌株的SERS信號，簡化數據分析程序，通過拉曼光譜圖直觀辨別出所檢測菌株。基于SERS技術和適配體快速檢測致病菌,可以在1h內定量檢測出金黃色葡萄球菌和單增李斯特菌。并且做到了在短積分時間（2s，是正常積分時間的1/10?1/5）內也可采集到低信噪并且穩定譜圖。首次將適配體免標記直接應用于SERS技術，首次在沒有拉曼標記物的情況下，依靠光譜圖直觀辨別細菌，為實現SERS技術在細菌檢測領域廣泛應用提供了基礎。

技術領域

本發明涉及一種以適配體為支架原位合成納米銀的SERS方法，是以適配體為支架在病原菌表面原位合成納米銀殼達到目標菌SERS信號特異性增強的方法，屬于食品安全檢測領域。

背景技術

早在1989年，Holt等人采集到了光合細菌細胞壁SERS光譜,從而拉起了SERS檢測微生物的序幕。近些年SERS技術在細菌的檢測中越發成熟，但是由于細菌與納米粒子的結合很難調控，得到的SERS譜圖重復性差。并且，病原菌的SERS譜圖差別很微弱，有些很難依據SERS圖譜直接區分，需要用化學計量學方法進行分類，增加了現場檢測的難度。針對這一系列問題，我們尋找到一種可以對靶標病原菌具有特異性與高親和力的寡核苷酸序列做支架，在細菌表面原位合成一層納米銀殼，來達到特異性獲取SERS信號的目的。這種寡核苷酸序列經折疊后特異性識別細菌表面位點并結合，由于它呈折疊狀，使吸附在它表面的小納米粒子團聚為一個大的納米粒子，這種團聚形成的納米粒子表面粗糙，熱點效應更明顯，增強效果更加理想。而由于結合位點固定，使熱點分布固定，得到高重復性、均一性的SERS信號。并且，該方法只能對目標菌株達到SERS增強的效果，可以通過光譜圖直觀識別所檢測細菌，省去了繁瑣的數據分析步驟。

發明內容

本發明公開了一種以適配體為支架原位合成納米銀的SERS方法，是以適配體為支架在病原菌表面原位合成納米銀殼達到目標菌SERS信號特異性增強的方法，目的旨在特異性增強目標菌株的SERS信號，簡化數據分析程序，通過拉曼光譜圖直觀辨別出所檢測菌株。

本發明公開的一種以適配體為支架原位合成納米銀的SERS方法，采用以下技術方案：

適配體與病原菌特異性結合后，浸入硝酸銀溶液中，然后加入硼氫化鈉快速將銀離子還原成納米銀殼，達到SERS信號特異性增強效果。參見圖1。

本發明所說的一種以適配體為支架原位合成納米銀的SERS方法，包括以下步驟：

1）在LB培養基中200rpm、37℃條件下震蕩培養冷凍的病原菌11小時；取1ml10⁷cfu/ml細菌用 MilliQ H₂O洗滌兩次；然后將細菌貯存在4℃冰箱中待用；

2）使用熱循環儀95℃變性兩分鐘，每40秒降2℃逐漸降溫至37℃，折疊好的適配體儲存于4℃冰箱備用；

3）適配體捕獲病原菌： 300nM折疊好的適配體分別與特異性病原菌和非特異性病原菌孵育20min，用緩沖液洗滌2次以去除未結合的適配體，4℃保存備用；

4）將步驟3）中適配體捕獲的病原菌與10mM硝酸銀孵育5min，加入10mM硼氫化鈉溶液，離心，棄上清，1ml MilliQ H2O重懸，4℃保存備用；

5）將步驟4）中樣品進行拉曼掃描。

發明的積極效果在于：基于SERS技術和適配體快速檢測致病菌,可以在1h內定量檢測出金黃色葡萄球菌和單增李斯特菌。并且做到了在短積分時間（2s，是正常積分時間的1/10-1/5）內也可采集到低信噪并且穩定譜圖。首次將適配體免標記直接應用于SERS技術，首次在沒有拉曼標記物的情況下，依靠光譜圖直觀辨別細菌，為實現SERS技術在細菌檢測領域廣泛應用提供了基礎。

附圖說明