[發明專利]檢測AGP1、SERPINA3和CDH1含量的系統在篩查活動性結核病患者中的應用

有效

• 申請號: 201610104527.8
• 申請日: 2016-02-25
• 公開（公告）號: CN105588944B
• 公開（公告）日: 2017-05-24
• 發明（設計）人: 張宗德;潘麗萍;孫會姍;賈紅彥;張霞
• 申請（專利權）人: 首都醫科大學附屬北京胸科醫院;北京市結核病胸部腫瘤研究所
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/569
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司11245
• 代理人: 關暢,任鳳華

技術領域

本發明涉及生物技術領域中檢測AGP1、SERPINA3和CDH1含量的系統在篩查活動性結核病患者中的應用。

背景技術

結核病(Tuberculosis,TB)是由結核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis，MTB)感染引發的慢性傳染性疾病，嚴重威脅人類健康。全國第五次結核病流行病學調查顯示我國現有超過500萬名成人活動性肺結核患者。成人感染結核分枝桿菌后，部分呈現帶菌生存狀態，并不會發展為結核病，稱為結核潛伏感染者(Latent tuberculosis infection,LTBI)；約5-10％的潛伏感染者會繼續發展為活動性結核病(Active tuberculosis,ATB)。活動性肺結核是指痰涂片陽性者,證明有結核分枝桿菌排出,病灶屬于活動期,胸片上常有斑片狀陰影或是結核空洞,或者播散病灶,說明結核分枝桿菌繁殖活躍,毒力強。國內各地區流行病學調查結果顯示，基于γ-干擾素釋放試驗(IGRA)得出的結核分枝桿菌感染率大約在20％-30％之間，即全國約有3-4億人為結核分枝桿菌感染者，數目龐大的無臨床癥狀的結核潛伏感染者是活動性結核病的重要來源。此外，由于結核潛伏感染的預防性治療方案與活動性結核病的抗癆治療方案顯著不同。因此，如何實現結核分枝桿菌潛伏感染者與活動性結核病患者的早期鑒別診斷至關重要。

常用的結核分枝桿菌感染診斷方法包括傳統的結核菌素實驗(TST)以及γ-干擾素釋放試驗(IGRAs)，TST方法容易受到卡介苗接種和非結核分枝桿菌的干擾，結核分枝桿菌感染診斷不夠明確，更無法區別結核潛伏感染和活動性結核病。新近推行的IGRAs方法，雖然能夠檢測結核分枝桿菌感染，但無法區分結核桿菌潛伏感染和活動性結核病。目前活動性結核病的診斷金標準仍然是經典的痰涂片染色顯微鏡下查找抗酸桿菌以及結核桿菌培養法，已有近百年的歷史。這兩種檢測方法的敏感性均不高，痰涂片染色法的敏感性約30％，結核桿菌培養法的敏感性約60％。痰涂片染色法雖然可以當天出結果，但不能區分結核桿菌和非結核分枝桿菌，也不能區分MTB是活菌還是死菌。結核桿菌培養法的敏感性雖高一些，但耗時較長，即使快速培養也需要1個月的時間才能得到結果。另外，對于臨床上大量的肺外結核和涂陰、菌陰的活動性結核病患者，金標準檢測方法的應用受到限制，加劇了診斷的困難，給及時治療帶來了阻力。近年來雖然陸續出現了一些先進的基于核酸擴增的分子生物學檢測技術(如XpertMTB/RIF assay)，但由于受到儀器設備和診斷費用的限制，以及假陽性率偏高等問題，還無法全面推廣。因此，現行的結核病診斷方法或輔助診斷手段都無法實現快速有效的鑒別診斷結核分枝桿菌潛伏感染和活動性結核病，使得臨床上面臨嚴重的治療延誤以及過度治療等問題。基于此，尋找新的活動性結核病特異標志物，鑒別診斷結核分枝桿菌潛伏感染和活動性結核病，已經成為活動性結核病臨床診斷中一項亟待解決的難題。

血漿蛋白質組組成成分、表達水平和疾病有密切聯系，用蛋白質組學方法分析動態變化的蛋白質組，對鑒別診斷活動性結核病和結核潛伏感染有重要意義。Labelfree 2D-LC-MSMS是將非同位素標記技術、二維液相色譜串聯質譜技術相聯用，信號離子表現為不同質荷比的峰，根據波峰的高度及面積可得到準確的蛋白質定量信息，非常適合對多樣本的平行分析。

Alpha-1-acid glycoprotein 1(AGP1)，α1酸性糖蛋白(α1AG)，早期稱乳清類粘蛋白，由肝臟合成，癌細胞也可合成。AGP1的肽鏈結構與Ig輕鏈可變區及部分重鏈區、結合珠蛋白α鏈結構類似，說明AGP1從Ig家系演變而來。體液中AGP1含量的變化可按下列病種排列依次升高，即漏出液、炎癥滲出液、惡性腫瘤滲出液。Alpha-1-antichymotrypsin(SERPINA3)，α-抗胰凝乳蛋白，雖然該蛋白的詳細生理功能不是很清楚，但是可以抑制中性粒細胞和肥大細胞類糜蛋白酶，兩者都可以激活使血管緊張素。E-cadherin(CDH1)，上皮細胞鈣粘蛋白，上皮細胞鈣粘蛋白是一種鈣離子依賴的細胞粘附分子,存在于上皮細胞,參與細胞的粘附和信息傳導過程,并與腫瘤的分級和預后均有一定的相關關系。上皮細胞鈣粘蛋白的細胞外區為信號肽結構,具有鈣離子結合點,能夠與鈣離子特異性結合,跨膜區起著膜固定作用,是細胞與細胞間緊密連接的關鍵,當其表達下調或功能障礙時,將使同種細胞失去粘附,意味著腫瘤細胞容易從原發病灶脫落分離。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是如何篩查活動性結核病患者。