[發明專利]一種茶樹組織培養的方法

有效

• 申請號: 201610104404.4
• 申請日: 2016-02-25
• 公開（公告）號: CN105494107B
• 公開（公告）日: 2018-04-10
• 發明（設計）人: 田麗麗;黃建安;劉仲華;李娟;林海燕
• 申請（專利權）人: 湖南農業大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司11002
• 代理人: 李相雨

技術領域

本發明屬于茶樹組織培養技術領域，具體涉及一種茶樹組織培養的方法。

背景技術

目前，茶樹(Camellia sinensis L.Kuntze.)屬山茶科，山茶屬，是一種多年生的木本、常綠植物。茶樹組織培養技術的研究起源于20世紀60年代末，英國劍橋大學以茶樹幼莖小塊為材料研究了離體咖啡堿的合成。50年來中外科學家在茶樹組織和器官培養領域做出了不懈的努力，在快速繁殖、植株再生和遺傳轉化、次生代謝產物等許多方面獲得了進展。但不容否認，茶樹組織培養還有不少難題未攻克，主要有污染、褐化、玻璃苗、難以分化、再生體系不完善等等。其中，因為茶樹多酚類物質含量高，褐化現象嚴重，阻礙了組培的后續工作。因此，研究一種降低褐化率，提高茶樹組織培養效率的方法為本領域目前迫切需要解決的技術難題。

發明內容

(一)要解決的技術問題

本發明要解決的技術問題是解決由于茶樹多酚類物質含量高，褐化現象嚴重的問題。

(二)技術方案

為了解決上述技術問題，本發明提供了一種茶樹幼葉組織培養的方法，包括如下步驟：

一種茶樹幼葉組織培養的方法，其特征在于：包括如下步驟：

(1)取生長健壯的嫩綠色茶樹幼葉為外植體；

(2)將所述外植體依次用酒精消毒和次氯酸鈉消毒；

(3)將消毒后的外植體沿垂直于葉脈的方向橫切數刀且不切斷；

(4)將所述外植體接種于經過滅菌后的液體培養基，再放入培養室中進行培養；所述液體培養基的pH值為5.4-5.8，具體組成為：MS+4.0mg/L 6-BA+1.0mg/L IBA+蔗糖30g，再轉接到固體培養基暗培養。

優選的，所述步驟2中用酒精消毒和次氯酸鈉消毒后，分別以無菌水進行沖洗，本發明中用70％-80％的酒精消毒5-10s，無菌水沖洗1遍，每次1-2min；用8％-12％次氯酸鈉消毒10-15min，無菌水沖洗4遍，每次1-2min。

優選的，將所述消毒后的外植體沿垂直葉脈方向橫切5-8刀，根據外植體大小，一般情況下沿垂直于葉脈的方向橫切5-8為最佳刀數，所述外植體在切割時，葉緣0.5-1cm處不切斷，切割后的外植體為一整片完整樣本。

優選的，所述外植體接種于裝有50ml培養基的250mL培養瓶中，每瓶接種5～6片所述外植體，優選250mL的培養瓶，太大容量的培養瓶浪費材料，變向提高成本；每個培養瓶中放置5～6片所述外植體，由于在外植體培養成功后，其培養瓶中優選放置5～6片所述外植體，若太少，培養液浪費，若太多，會因為空間狹小導致新苗放置空間不足。

優選的，所述步驟4中所述培養具體為：將所述外植體接種于液體培養基暗培養3d后轉接到固體培養基暗培養，轉接到固體培養基暗培養時，由于培養時間的變化，褐化率與萌芽率均發生變化。

所述暗培養條件：溫度22-25℃；所述光培養條件為：溫度22-25℃，光照強度1500-2000Lx，光照時間12h/d，暗培養與光培養培養總時間25d。

(三)有益效果

本發明的上述技術方案具有如下優點：本發明公開了一種茶樹幼葉組織培養的方法，其方法是將茶樹幼葉外植體消毒后將茶樹幼葉接種于不含瓊脂的液體培養基上，每瓶接種6個沿垂直葉脈方向橫切5-8刀的茶樹幼葉，接種于液體培養基暗培養3d后轉接到固體培養基上暗培養12d，過這種方法處理過的外植體褐化率為32％，萌芽率高達68％；本發明利用液固共培養和暗培養相結合的辦法，明顯降低茶樹組織培養過程中外植體褐化率，顯著提高萌芽率和效率。

附圖說明

圖1是本發明實施例茶樹幼葉組織培養的方法的流程示意圖；

具體實施方式

為使本發明實施例的目的、技術方案和優點更加清楚，下面將結合本發明實施例中的附圖，對本發明實施例中的技術方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例是本發明的一部分實施例，而不是全部的實施例。基于本發明中的實施例，本領域普通技術人員在沒有做出創造性勞動的前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本發明保護的范圍。

實施例1

本發明實施例提供的茶樹幼葉組織培養的方法，其步驟如下；

取生長健壯的嫩綠色茶樹幼葉為外植體；

將茶樹幼葉用70％的酒精消毒10s，無菌水沖洗1遍；用10％次氯酸鈉消毒15min，無菌水沖洗4遍；

將每個茶樹幼葉沿垂直葉脈方向橫切5-8刀，所述外植體在切割時，葉緣0.5-1cm處不切斷；