[發(fā)明專利]S-腺苷甲硫氨酸合成酶制劑、及其制備方法和用途

有效

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• 申請日: 2016-02-24
• 公開（公告）號: CN105624130B
• 公開（公告）日: 2021-01-26
• 發(fā)明（設計）人: 龔俊;高長文;高秋峰;劉希
• 申請（專利權）人: 北京九強生物技術股份有限公司
• 主分類號: C12N9/10
• 分類號: C12N9/10;C12N15/54;C12N15/70;C12Q1/48;C12Q1/32;C12Q1/34
• 代理公司: 北京戈程知識產(chǎn)權代理有限公司 11314
• 代理人: 程偉;程云

本申請涉及S?腺苷甲硫氨酸合成酶制劑、及其制備方法和用途。本公開的制備方法利用基因工程技術將S?腺苷甲硫氨酸合成酶基因構建至原核表達載體中，并轉化大腸桿菌構建重組宿主細胞；通過補料分批發(fā)酵得到高產(chǎn)量的菌體；之后通過親和層析技術，對S?腺苷甲硫氨酸合成酶純化，所得蛋白的色譜純度在90％以上。本申請還涉及S?腺苷甲硫氨酸合成酶在制備同型半胱氨酸診斷試劑中的用途。

技術領域

本公開涉及生物化學領域；具體而言涉及S-腺苷甲硫氨酸合成酶酶制劑及其生產(chǎn)方法和用途。

背景技術

S-腺苷甲硫氨酸合成酶(以下簡稱MAT)(EC 2.5.1.6)是生物體內(nèi)一種非常重要的酶。在有Mg²⁺和K⁺存在的情況下，它可以催化L-Met與ATP反應，生成S-腺苷甲硫氨酸(SAM)。SAM是生物體內(nèi)重要的中間代謝產(chǎn)物，參與體內(nèi)多種生化反應。S-腺苷甲硫氨酸合成酶是一種重要的原料酶。

現(xiàn)有的S-腺苷甲硫氨酸合成酶生產(chǎn)方法主要采用酵母系統(tǒng)(參見1-4)，包括畢赤酵母和釀酒酵母。這種方法的缺點主要是生產(chǎn)過程相對原核表達體系來說比較復雜，產(chǎn)量較低，同時成本高。這最終導致MAT的生產(chǎn)成本提高。因此，本領域當中仍然需要一種成本更有效的方法來生產(chǎn)高純度的MAT。

目前的臨床檢驗中，對同型半胱氨酸(HCY)的檢測以酶循環(huán)法為主導地位。現(xiàn)有技術的循環(huán)酶法檢測試劑盒有兩種：一種為甲基轉移酶和水解酶的循環(huán)酶法；另一種為胱硫醚循環(huán)酶法。循環(huán)酶法簡便易行，已經(jīng)在臨床廣泛采納。

現(xiàn)有技術中，采用酶循環(huán)法測定HCY的檢測試劑，包括但不限于如下文獻中所報道的：CN104140996A；CN104630324A；CN104198726A；張傳寶等人，對循環(huán)酶法同型半胱氨酸測定試劑盒的評價，中華檢驗醫(yī)學雜志，2006；葉余輝，循環(huán)酶法測定血清同型半胱氨酸試劑盒的評價，中國醫(yī)藥指南，2013；王興寧等人，循環(huán)酶法測定同型半胱氨酸試劑盒評價，標記免疫分析與臨床，2014。

然而，胱硫醚循環(huán)酶法缺陷在于易受人體內(nèi)源的胱硫醚干擾。甲基轉移酶和水解酶的循環(huán)酶法不受人體內(nèi)源胱硫醚的干擾，但是依然存在穩(wěn)定性差等缺點。因此，本領域依然需要提供一種更加改進的循環(huán)酶法檢測試劑。

發(fā)明內(nèi)容

根據(jù)本公開的一方面，提供一種酶制劑，其含有按質(zhì)量計不低于90％的S-腺苷甲硫氨酸合成酶；例如純度不低于91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或99.5％的S-腺苷甲硫氨酸合成酶。

在本申請的上下文中，純度表征了物質(zhì)含雜質(zhì)的程度，雜質(zhì)越少，純度越高。對于蛋白質(zhì)純度的測定允許采用本領域技術人員公知的任何方法(包括現(xiàn)在的以及未來的測定方法)，包括但不限于電泳法、色譜法。在一些實施方式中，本申請中MAT酶制劑的純度是通過電泳法所確定的純度。具體而言，在電泳法中，將樣本上樣于凝膠中進行電泳，然后對凝膠進行染色，將代表著MAT的條帶的染色強度和全部條帶的染色強度進行比較，通過所獲得的比例確定MAT在酶制劑中的純度。

在另一些實施方式中，本申請MAT酶制劑的純度是通過色譜法所確定的純度。例如，將樣本上樣于色譜柱上，當組分流出色譜柱時通過紫外檢測信號，將代表著MAT的色譜峰面積和全部色譜峰面積進行比較，通過所獲得的比例確定MAT在酶制劑中的含量。

在一些實施方式中，所述S-腺苷甲硫氨酸合成酶的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。