[發明專利]一種海參卵肽鈣螯合物的制備方法

有效

• 申請號: 201610102104.2
• 申請日: 2016-02-25
• 公開（公告）號: CN105671114B
• 公開（公告）日: 2019-12-20
• 發明（設計）人: 孫娜;崔蓬勃;吳海濤;于翠平;唐越;閻佳楠;查越
• 申請（專利權）人: 大連工業大學
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06
• 代理公司: 21238 大連格智知識產權代理有限公司
• 代理人: 劉琦

1.一種海參卵肽鈣螯合物的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

S1、海參卵預處理：將海參卵勻漿，沸水浴5～10min，得到海參卵勻漿液；

S2、向步驟S1制得的海參卵勻漿液中加入正己烷/無水乙醇混合液萃取脫脂，所述正己烷/無水乙醇混合液中正己烷與無水乙醇的體積比為2～3:1，所述海參卵勻漿液與所述正己烷/無水乙醇混合液的體積比為1:10～15，50℃萃取4～6h；

所述萃取脫脂過程重復1～2次；抽濾，所得濾餅自然風干、粉碎，得到海參卵脫脂粉，采用凱氏定氮儀測定蛋白含量；

S3、向步驟S2制得的海參卵脫脂粉加水至底物蛋白濃度為2～4g/100mL制得酶解反應液，按3000U/g底物蛋白的比例向所述酶解反應液中加入蛋白酶進行酶解反應，反應3～6h；調pH至7.0，100℃滅酶10min，4000r/min離心20min，收集上清液，冷凍干燥即得海參卵酶解物；

所述蛋白酶為胰蛋白酶，調節所述酶解反應液pH至8.0，溫度為37℃；

S4、將步驟S3制得的海參卵酶解物與CaCl₂溶液、磷酸鹽緩沖液混合，得到螯合反應液，所述螯合反應液中酶解物終濃度為0.5mg/mL，CaCl₂終濃度為5mmol/L，磷酸鹽緩沖液終濃度為20mmol/L；將所述螯合反應液在模擬人體回腸條件下進行螯合反應1h后，5000×g離心10min，取上清液經0.45μm水系微孔濾膜過濾后，凍干、粉碎即得海參卵肽鈣螯合物；所述模擬回腸條件為控制反應液溫度37℃、控制反應液pH為7.0。

2.根據權利要求1所述海參卵肽鈣螯合物的制備方法，其特征在于，步驟S4所述模擬回腸條件控制反應液pH的方法為采用pH計監測反應液pH，采用1mol/L的HCl溶液或1mol/L的NaOH溶液調整pH。