[發明專利]一種以生物胺為特征標志物鑒別蜂毒種類的方法

有效

• 申請號: 201610101614.8
• 申請日: 2016-02-24
• 公開（公告）號: CN105738516B
• 公開（公告）日: 2018-01-05
• 發明（設計）人: 周金慧;李熠;張文文;吳黎明;牛慶生;張金振;金玥;王琳;趙文
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院蜜蜂研究所
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司11002
• 代理人: 王文君

1.一種以生物胺為特征標志物鑒別蜂毒種類的方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)配制標準工作液：取適量生物胺標準物質溶于純水中，配制成1ng/mL～1000ng/mL不同濃度梯度的多個標準工作液；

所述生物胺為組織胺、多巴胺、五羥色胺、腎上腺素、去甲腎上腺素；

(2)制備待測樣品溶液：取適量待測蜂毒樣品溶于水中，渦旋處理后取上清液即得；

(3)采用HPLC/MS/MS方法檢測待測樣品溶液和標準工作液：采用單點校準或多點校準法對蜂毒中的生物胺進行定性分析和定量分析；

所述HPLC條件為：采用PFP色譜柱；

流動相：A相：0.1％的甲酸水，B相：甲醇溶液；梯度洗脫條件如下：

所述MS/MS的檢測參數為：

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，按如下方式配制標準工作液：取等量生物胺標準物質同時溶于純水中，配制混合標準工作液。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述多個標準工作液為3-10個。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述多個標準工作液為7個。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述標準工作液的濃度梯度分別為1ng/mL，5ng/mL，10ng/mL，50ng/mL，100ng/mL，500ng/mL，1000ng/mL。

6.根據權利要求1-2、4-5任一項所述的方法，其特征在于，所述待測樣品溶液采用如下方法制備：每5.0mg樣品加入1-3mL純水，渦旋5-15min，離心后取上清液備用。

7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，所述待測樣品溶液采用如下方法制備：每5.0mg樣品加入2mL純水，渦旋10min，1000rpm離心后取上清液備用。

8.根據權利要求1-2、4-5、7任一項所述的方法，其特征在于：所述HPLC還包括如下檢測條件：柱溫：25～35℃；流速：0.2～0.5mL/min；進樣量：4.0-6.0μL；

和/或，所述MS/MS還包括如下檢測條件：霧化器溫度：300～400℃；霧化器流速：5-8L/min；霧化器壓力：30～40psi；毛細管電壓:1800～2200V；鞘流氣溫度：320～380℃；鞘流氣流速：8～10L/min；錐孔電壓:800～1200V。

9.根據權利要求8所述的方法，其特征在于：所述HPLC還包括如下檢測條件：柱溫30℃，流速0.3mL/min，進樣量5.0μL；

和/或，所述MS/MS還包括如下檢測條件：霧化器溫度：350℃；霧化器流速：6L/min；霧化器壓力：35psi；毛細管電壓:2000V；鞘流氣溫度：350℃；鞘流氣流速：9L/min；錐孔電壓:1000V。

10.根據權利要求1-2、4、5、7、9任一項所述的方法，其特征在于：所述蜂毒為意大利蜜蜂蜂毒、王漿高產蜜蜂蜂毒、安納托利亞蜜蜂蜂毒、高加索蜜蜂蜂毒、卡尼鄂拉蜜蜂蜂毒、喀爾巴阡蜜蜂蜂毒中的一種或多種。

11.根據權利要求8所述的方法，其特征在于：所述蜂毒為意大利蜜蜂蜂毒、王漿高產蜜蜂蜂毒、安納托利亞蜜蜂蜂毒、高加索蜜蜂蜂毒、卡尼鄂拉蜜蜂蜂毒、喀爾巴阡蜜蜂蜂毒中的一種或多種。