[發明專利]一種獲得抗旱性增強的植物的方法

有效

• 申請號: 201610101065.4
• 申請日: 2016-02-24
• 公開（公告）號: CN107119068B
• 公開（公告）日: 2020-04-24
• 發明（設計）人: 高彩霞;張華偉;梁振
• 申請（專利權）人: 中國科學院遺傳與發育生物學研究所
• 主分類號: C12N15/82
• 分類號: C12N15/82;A01H5/00;A01H6/46
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;張立娜

1.一種獲得耐旱性增強的植物的方法，包括如下步驟：將目的植物中與擬南芥AtCER9基因同源的基因進行突變，從突變后的植物中獲得與所述目的植物相比耐旱性增強的植物；

所述將目的植物中與擬南芥AtCER9基因同源的基因進行突變，是通過基因編輯的方法實現的；

所述基因編輯由核酸酶介導，所述核酸酶能夠特異性剪切所述目的植物中與擬南芥AtCER9基因同源的基因中的靶標片段；所述核酸酶為CRISPR/Cas9核酸酶；

所述將目的植物中與擬南芥AtCER9基因同源的基因進行突變，是通過如下實現的：向所述目的植物的細胞或組織中導入表達CRISPR/Cas9核酸酶的遺傳物質，或者直接導入Cas9蛋白及向導RNA，再將導入后的細胞或組織培養成完整植株；

所述遺傳物質為DNA質粒或DNA線性片段或體外轉錄的RNA；

所述靶標片段為所述目的植物中與擬南芥AtCER9基因同源的基因序列中符合5’-N_X-NGG-3’或5’-CCN-N_X-3’序列排列規則的片段；

N表示A、G、C和T中的任一種，14≤X≤30，且X為整數，N_X表示X個連續的脫氧核糖核苷酸；

所述目的植物為玉米或小麥；

當所述目的植物為玉米時，所述目的植物中與擬南芥AtCER9基因同源的基因為ZmCER9-1基因和/或ZmCER9-2基因；所述ZmCER9-1基因在玉米基因組中的序列如序列表中序列2所示；所述ZmCER9-2基因在玉米基因組中的序列如序列表中序列3所示；所述靶標片段的序列如序列表中序列25；

當所述目的植物為小麥時，所述目的植物中與擬南芥AtCER9基因同源的基因為TaCER9-a基因和/或TaCER9-b基因和/或TaCER9-d基因；所述TaCER9-a基因在小麥基因組中的已知序列如序列表中序列4所示；所述TaCER9-b基因在小麥基因組中的已知序列如序列表中序列5所示；所述TaCER9-d基因在小麥基因組中的已知序列如序列表中序列6所示；所述靶標片段的序列如序列表中序列26。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述細胞為任何能作為導入受體并能經過組織培養再生為完整植株的細胞；所述組織為任何能作為導入受體并能經過組織培養再生為完整植株的組織。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于：所述細胞為原生質體細胞或懸浮細胞；所述組織為愈傷組織、幼胚、成熟胚、葉片、莖尖，幼穗或下胚軸。

4.根據權利要求2或3所述的方法，其特征在于：所述導入的方法為基因槍法、農桿菌侵染法、PEG誘導原生質體法、電極法、碳化硅纖維介導法、真空滲入法或其他任何導入方法。