[發(fā)明專利]半滑舌鰨補(bǔ)體成分C5a的重組蛋白及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610100997.7
• 申請(qǐng)日: 2016-02-24
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN105541987B
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-06-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李墨非;孫黎
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)科學(xué)院海洋研究所
• 主分類號(hào): C07K14/46
• 分類號(hào): C07K14/46;A61K38/17;A61P31/04;A61P31/12
• 代理公司: 沈陽(yáng)科苑專利商標(biāo)代理有限公司 21002
• 代理人: 李穎;周秀梅

本發(fā)明涉及分子生物學(xué)領(lǐng)域，具體的說(shuō)是半滑舌鰨補(bǔ)體成分C5a(CsC5a)的重組蛋白及其應(yīng)用。半滑舌鰨補(bǔ)體成分C5a的重組蛋白以半滑舌鰨cDNA為模板，用引物C5F1和C5R1進(jìn)行PCR擴(kuò)增補(bǔ)體成分CsC5a基因，擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)誘導(dǎo)表達(dá)、純化即為重組蛋白。本發(fā)明補(bǔ)體成分CsC5a重組蛋白能夠顯著促進(jìn)免疫細(xì)胞吞噬作用，提高魚類的抗細(xì)菌或抗病毒能力。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及分子生物學(xué)領(lǐng)域，具體的說(shuō)是半滑舌鰨補(bǔ)體成分C5a(CsC5a)的重組蛋白及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

補(bǔ)體因子5(Complement factor 5,C5)是補(bǔ)體系統(tǒng)的一個(gè)成分。人類C5蛋白由α、β兩條多肽鏈通過(guò)二硫鍵組成,分子量為190kDa。C5靠近N端的第74-75位精氨酸-亮氨酸鍵為C5轉(zhuǎn)化酶作用的部位。補(bǔ)體系統(tǒng)通過(guò)三條途徑(經(jīng)典途徑、旁路途徑和凝集素途徑)激活后，均生成C5轉(zhuǎn)化酶。C5蛋白在C5轉(zhuǎn)化酶的作用下裂解為C5a和C5b兩個(gè)片段。C5a是C5的α鏈的N端約8-10kD的肽段，是炎癥反應(yīng)的重要介質(zhì)和趨化因子。C5a通過(guò)與細(xì)胞表面的C5a受體結(jié)合而激活相應(yīng)的信號(hào)通路，剌激白細(xì)胞產(chǎn)生呼吸爆發(fā)、趨化效應(yīng)等炎癥反應(yīng)，從而輔助激活機(jī)體的先天性免疫，促進(jìn)獲得性免疫應(yīng)答。目前，C5和C5a已經(jīng)在虹鱒和鯉魚等魚類中報(bào)道，但是它們?cè)隰~類中的應(yīng)用性研究尚缺乏。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明目的在于提供一種半滑舌鰨補(bǔ)體成分C5a的重組蛋白及其應(yīng)用。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：

一種半滑舌鰨補(bǔ)體成分C5a的重組蛋白，半滑舌鰨補(bǔ)體成分C5a的重組蛋白以半滑舌鰨cDNA為模板，用引物C5F1和C5R1進(jìn)行PCR擴(kuò)增補(bǔ)體成分CsC5a基因，擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)誘導(dǎo)表達(dá)、純化即為重組蛋白，所述C5F1為5’-GATATCATGGAGAAGAGGATAAAAGCGGCA-3’；C5R1為5’-GATATCGCCGAGGACGAGGGTTTCCTCT-3’。

一種半滑舌鰨補(bǔ)體成分C5a的重組蛋白的應(yīng)用，所述半滑舌鰨補(bǔ)體成分C5a的重組蛋白可用于制備增強(qiáng)外周血淋巴細(xì)胞的吞噬作用的制劑。

一種半滑舌鰨補(bǔ)體成分C5a的重組蛋白的應(yīng)用，所述半滑舌鰨補(bǔ)體成分C5a的重組蛋白可用于制備抑制細(xì)菌或病毒感染的制劑。

細(xì)菌為哈氏弧菌，是魚類常見(jiàn)的致病性細(xì)菌，能感染多種養(yǎng)殖魚類包括牙鲆、大菱鲆、半滑舌鰨等。

病毒為細(xì)胞腫大病毒，是一種嚴(yán)重危害養(yǎng)殖魚類的病毒，能感染大菱鲆、條石鯛、半滑舌鰨等。

本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn)：本發(fā)明的補(bǔ)體成分C5a重組蛋白，能夠顯著提高外周血淋巴細(xì)胞的吞噬能力和增強(qiáng)魚類的抗細(xì)菌及抗病毒能力。

附圖說(shuō)明

圖1為本發(fā)明實(shí)施例提供的重組補(bǔ)體成分C5a(命名為rCsC5a)電泳圖。泳道1，分子量標(biāo)準(zhǔn)；泳道2,補(bǔ)體成分rCsC5a。

圖2為本發(fā)明實(shí)施例提供的重組補(bǔ)體成分rCsC5a的促吞噬作用。A,半滑舌鰨外周血淋巴細(xì)胞(peripheral blood leukocytes，PBL)。B，PBL+FITC-標(biāo)記的哈氏弧菌。C,PBL+FITC-標(biāo)記的哈氏弧菌+rCsC5a。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明。實(shí)施例旨在對(duì)本發(fā)明進(jìn)行舉例描述，而非以任何形式對(duì)本發(fā)明進(jìn)行限制。

在本發(fā)明實(shí)施例中所涉及到的常規(guī)性實(shí)驗(yàn)方法均采用如下方法：

1.質(zhì)粒提取、DNA(PCR)產(chǎn)物純化、DNA片段從凝膠中回收皆使用“天根生化科技(北京)有限公司”的相應(yīng)試劑盒。