[發(fā)明專利]一種小RNA分子及其在抗病毒中的應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610100968.0
• 申請日: 2016-02-24
• 公開（公告）號: CN105734060B
• 公開（公告）日: 2018-12-14
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 孫黎;張寶存;張健
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院海洋研究所
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;A61K48/00;A61P31/12;A61P31/20
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標(biāo)代理有限公司 21002
• 代理人: 李穎;周秀梅

本發(fā)明涉及分子生物學(xué)領(lǐng)域，具體的說是一種小RNA分子及其在抗病毒中的應(yīng)用。小RNA分子具有下列序列：5’?UUCCGGGUGUUUUCGUGUCUUU?3’。本發(fā)明小RNA分子注射魚類后能夠顯著提高魚類抗病毒免疫基因表達以及抑制病毒復(fù)制。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及分子生物學(xué)領(lǐng)域，具體的說是一種小RNA分子及其在抗病毒中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

非編碼小RNA在動物和植物的生命過程中起重要作用。這些小RNA調(diào)控轉(zhuǎn)錄后基因表達，其通常作用機制是通過與靶mRNA特異性結(jié)合，阻止mRNA的翻譯，從而調(diào)控發(fā)育、免疫、細胞凋亡、病原與宿主相互作用等各種生命活動。研究表明，許多病毒利用小RNA操縱宿主的基因表達以促進病毒侵染；與病毒蛋白相比，小RNA分子小，沒有免疫原性，容易規(guī)避宿主的免疫防御。對宿主而言，許多動物能夠合成病毒基因靶向性的小RNA，這些小RNA特異性識別并結(jié)合病毒靶mRNA，干擾病毒基因的表達，導(dǎo)致病毒復(fù)制被抑制。因此，小RNA在病毒病的免疫防御中具有巨大的應(yīng)用潛能。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明目的在于提供一種小RNA分子及其在抗病毒中的應(yīng)用。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：

一種小RNA分子，小RNA分子具有下列序列：5’-UUCCGGGUGUUUUCGUGUCUUU-3’

一種小RNA分子的應(yīng)用，所述小RNA分子可應(yīng)用于制備刺激抗病毒免疫基因表達或抑制病毒復(fù)制的制劑。

所述病毒為細胞腫大病毒。

本發(fā)明具有如下優(yōu)點：本發(fā)明的小RNA分子注射魚類后能夠顯著抑制病毒復(fù)制和提升魚類抗病毒免疫基因表達。

附圖說明

圖1為本發(fā)明實施例提供的小RNA分子731A刺激牙鲆抗病毒免疫基因IFN、ISG15、Mx和viperin的表達(**P<0.01；*P<0.05)。

具體實施方式

下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進一步說明。實施例旨在對本發(fā)明進行舉例描述，而非以任何形式對本發(fā)明進行限制。

實施例1

小RNA分子731A刺激抗病毒免疫基因表達

步驟1)小RNA分子稀釋液制備

本發(fā)明的小RNA分子731A的序列為5’-UUCCGGGUGUUUUCGUGUCUUU-3’。小RNA分子731A由上海Genepharma公司合成。731A在PBS中稀釋至200ug/ml，即為小RNA分子稀釋液。

所述PBS組成成分按重量百分比計：0.8％NaCl,0.02％KCl,0.358％Na₂HPO₄.12H₂O,0.024％NaH₂PO₄，余量為水。

步驟2)病毒懸液制備

將細胞腫大病毒RBIV-C1(具體制備方法見Zhang M,Xiao Z,Hu Y,SunL.Characterization of a megalocytivirus from cultured rock bream,Oplegnathusfasciatus(Temminck&Schlege),in China.Aquac Res.2012；43:556–64)于PBS中稀釋至10⁶copies/ml，即為病毒懸液。

步驟3)小RNA分子混合液和對照混合液的制備