[發明專利]牛膝粗多糖、多糖組分和均一多糖、其制備方法及其用途

有效

• 申請號: 201610099571.4
• 申請日: 2016-02-23
• 公開（公告）號: CN107098984B
• 公開（公告）日: 2021-11-23
• 發明（設計）人: 單俊杰;王玉霞;汪艷艷;麻浩;李帥;李海霞;巫亞俊;武軍華;劉坤璐;陳志宏;劉圓圓
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍軍事醫學科學院毒物藥物研究所
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00;A61K31/715;A61K39/39;A61K39/395;A61P37/02;A61P37/04
• 代理公司: 中國貿促會專利商標事務所有限公司 11038
• 代理人: 劉海羅

本發明屬于醫藥技術領域，具體地，涉及疫苗和免疫領域。具體地，本發明涉及從牛膝中提取的牛膝粗多糖、牛膝多糖組分以及牛膝均一多糖。其中，所述牛膝粗多糖選自：牛膝粗多糖1：主要由果糖組成；分子量為1000－3000Da；優選地，還含有少量葡萄糖；牛膝粗多糖2：主要由阿拉伯糖、葡萄糖、鼠李糖、半乳糖和半乳糖醛酸組成；分子量為1.0×10⁴－2.0×10⁵Da。本發明還涉及含有上述多糖的藥物組合物，上述多糖的制備方法及其疫苗用途。本發明的牛膝粗多糖、多糖組分以及均一多糖均具有良好的免疫佐劑活性和免疫調節作用，具有制備疫苗佐劑和免疫調節藥物的潛力。

技術領域

本發明屬于醫藥技術領域，具體地，涉及疫苗和免疫領域。具體地，本發明涉及從牛膝中提取的粗多糖、多糖組分以及均一多糖。本發明還涉及含有它們的藥物組合物、其制備方法、以及其用于疫苗佐劑、免疫調節劑或制備疫苗輔料、疫苗制劑、疫苗組合物或抗體的用途。

背景技術

牛膝(Achranthis Bidentata和Cyathula officinalis)是莧科植物牛膝的干燥根，具有活血、通經、補肝腎、強筋骨之功用。牛膝含有多種次生代謝產物，如齊墩果酸及其皂苷、蒽醌類化合物等，還含有較高含量的多糖[李金亭,等.牛膝類藥材的生物學與化學成分的研究進展.中草藥，2006，37(6):952-956]。

近年來與本發明領域相關的研究和報道歸納如下：

(1)牛膝多糖制備方法及化學成分的研究

許海丹等將牛膝粉末用80％乙醇加熱回流，殘渣加水煎煮提取,合并濾液、濃縮。濃縮液中加入乙醇至含醇量達到80％。靜置12h后分離沉淀，再水溶解，采用Sevage方法去除蛋白。收集清液，再加入4倍乙醇醇析，沉淀部分用乙醚、丙酮反復洗滌，干燥，制備牛膝粗多糖。(許海丹，等.牛膝多糖的提取與含量測定.科學技術與工程，2009，9(1)：107-109.)

劉傳敏等首先將纖維素酶和牛膝粉末一起加水在恒溫搖床上保持一段時間，然后沸水浴煎煮10min，再超聲20min，離心，上清合并、濃縮，然后加乙醇至含醇量為80％。靜置、離心，沉淀加蒸餾水溶解，三氯乙酸脫蛋白，上清液揮干溶劑，即得牛膝多糖粗品(劉傳敏，等.酶解超聲法提取川牛膝多糖的正交試驗研究.中獸醫醫藥雜志，2009，5：51-53)。

魏濤等采用以下工藝制備牛膝粗多糖：懷牛膝→70℃干燥→粉碎過40目篩→石油醚脫脂，體積分數80％乙醇回流→超聲波輔助水浸提→離心取上清液→Sevage法除蛋白→濃縮→乙醇沉淀→過濾洗滌→低溫干燥→懷牛膝粗多糖(魏濤，等.懷牛膝多糖的超聲波輔助提取工藝及其抗氧化性活性.食品與發酵工業，2011，37(2)：191-194)。

方積年等將牛膝水煎煮、去除游離蛋白、透析、乙醇醇沉、再水溶解后，依次進行Cellex D和Sephadex G-150柱層析，得到一個肽多糖ABAB，ABAB分子量為2.3×10⁴，有D-葡萄糖酸、D-半乳糖、D-半乳糖酸、L-阿拉伯糖和L-鼠李糖組成，摩爾比為12:2:3:1:1。多糖主鏈結構為(1→4)-D-葡萄糖酸和(1→4)-D-半乳糖酸組成。肽含量為24.7％，主要有甘氨酸、谷氨酸、門冬氨酸和絲氨酸組成(方積年，張志花，劉柏年.牛膝多糖的化學研究.藥學學報，1990，25(7)：526-529)。

劉穎華等采用水提、醇沉法提取川牛膝粗多糖CPC(無具體操作方法)，CPC再經685弱堿陰離子交換柱層析分離和Bio-Gel P2凝膠柱層析純化，得到川牛膝均一多糖RCP。RCP的分子量(Mr)主要分布在1000-2200，單糖組成為D-果糖和D-葡萄糖(劉穎華，何開澤，張軍峰，蒙義文.川牛膝多糖的分離、純化及單糖組成.應用與環境生物學報，2003，9(2)：141-145)。